Онколитический вирус болезни Ньюкасла и аутологичные опухолевые клетки в комплексной терапии рака

17.06.2007

Была поставлена задача оптимизации и совершенствования имеющихся технологий получения аутологичных и модифицированных ВБН вакцин, а также онколитического ВБН для использования у пациентов с различными злокачественными заболеваниями.

Применяемый нами апатогенный штамм «Ла-Сота» вируса болезни Ньюкасла (живая вакцина для птиц) выращивается в свободных от патогенной микрофлоры куриных эмбрионах. Для внесения в человеческие опухолевые клетки и инъекций пациентам вирус очищали ультрацентрифугированием и проверяли на стерильность и безвредность. Оценка токсичности препарата (вакцины) проводилась в соответствии с критериями, рекомендованными ВОЗ. Препарат при необходимости может быть лиофилизован, сохраняя при этом свои свойства в течение года.

Для приготовления аутологичной вакцины используют опухолевые клетки, выделенные непосредственно в ходе удаления опухоли. Технология приготовления вакцины общеизвестна и предполагает дезагрегацию образцов опухоли, культивирование клеток, облучение клеток с целью блокады их пролиферативной активности и различные приемы модификации для повышения эффективности препарата. Создание культуры опухолевых клеток - сложный и неоднозначный процесс. По мнению абсолютного большинства исследователей, существуют значительные трудности и особенности в обеспечении условий, благоприятных для индивидуальных первичных культур опухолевых клеток. Выживание клеток и их пролиферация возможны только при воссоздании всех внешних условий, которые клетки имели in vivo. Разработанные и применяемые нами оригинальные технологии выделения и культивирования клеток позволяют получить пролиферирующие первичные культуры более чем в 70% случаев для таких опухолей, как меланома кожи, рак почки, толстой кишки, яичников и молочной железы, а клеточные линии - по крайней мере в 50% случаев.

Не менее специфичной в процессе приготовления клеточных вакцин является необходимость инактивировать их способность к размножению с одновременным сохранением метаболической активности и повышения иммуногенности собственных опухолевых клеток с помощью вирусной модификации. На данном этапе клетки инактивиро-вали посредством гамма-облучения (дозы которого подбирали индивидуально), замораживали в жидком азоте и использовали для вакцинации в дозировках 10 - 50 млн после обработки 10 - 100 ID50 вируса (ВБН) на клетку.

Более специфическую аутовакцину получали из размножающихся in vitro клеток - перевиваемых опухолевых линий. Такие линии клеток могут быть получены из операционного или биопсийного материала и способны размножаться бесконечно долго, обеспечивая необходимое для вакцинации количество гомогенных опухолевых клеток. Эти линии клеток также замораживали, инактивиро-вали гамма-излучением и обрабатывали вирусом перед введением пациентам.

Известно, что принцип действия противоопухолевых вакцин основан на усилении противоопухолевой защиты, заложенной в природе иммунитета здорового человека. Недостаточность противоопухолевого иммунитета обусловлена растущей опухолью и/или ее прогрессированием с возникновением множества метастазов и иммунодепрессивным эффектом противоопухолевой химиотерапии и облучения.

Усиление эффективности противоопухолевых вакцин путем повышения иммуногенности опухолевых антигенов достигалось нами путем модификации вакцины непатогенным вирусом (ВБН) и использования человеческого рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ). Основное биологическое действие Г-КСФ - гемопоэтическое, главным образом ней-трофилопоэтическое. Его введение в организм приводит к увеличению содержания в крови функционально активных нейтрофилов. Кроме этого, препарат повышает биохимическую (синтез про-теаз), фагоцитарную, хемотаксическую активность, усиливает в организме синтез других цитокинов (интерферонов, трансформирующего фактора роста в и др.). Тем самым активизируются различные неспецифические и специфические механизмы защиты организма.

Предварительная клиническая и иммунологическая оценка эффективности вакцинотерапии в сочетании с Г-КСФ, а также наличие клеточных линий, полученных на этапах создания вакцины, позволили пересмотреть принципы и подходы химиотерапии в данном комплексе лечения. Правильный подбор препаратов, избирательно действующих на опухолевые клетки, выбор оптимальной дозы, режима и способа применения позволили проводить курсы химиотерапии длительно, без каких-либо осложнений в течение всего курса вакцинотерапии.

Предполагая возможность данной комплексной методики лечения рака, мы учитывали и слабые стороны аутовакцинации: результат зависит от индивидуальных особенностей противоопухолевого иммунитета, а опухоль характеризуется не только множественностью антигенов, но и повышенной мутационной активностью с дальнейшим усилением признаков злокачественности.