Эпидемиологическая ситуация в отношении моноцитарного эрлихиоза и гранулоцитарного анаплазмоза человека в Прибайкалье (результаты рекогносцировочных исследований)

18.10.2007

И.В. Козлова1, В.И. Злобин2, М.М. Верхозина1, В.А. Рар3, О.В. Лисак1, Е.К. Дорощенко1, С.С. Шулунов1, О.Л. Богомазова4, А.М. Антонова4

1 Институт эпидемиологии и микробиологии НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН, Иркутск

2 ГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» РАМН, Москва

3 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск

4 ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Иркутской области»

Введение

Исследования моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ) в России начались в 1999 году, после верификации случаев этого заболевания у больных в Пермской области [16]. К настоящему времени установлено широкое распространение Ehrlichia muris (по предположению многих исследователей -этиологический агент МЭЧ) на ряде территорий азиатской части России [4, 10 - 12]. Возбудитель гранулоцитарного анаплазмоза человека (ГАЧ) (Anaplasma phagocytophilum) был впервые выявлен в Балтийском регионе России [1, 2] и граничащих с российским Дальним Востоком северо-восточных районах Китая [8]. В дальнейшем анаплазмы и эрлихии обнаружены в Приморском, Хабаровском и Алтайском краях, в Новосибирской, Тюменской, Омской и Челябинской областях [9, 10 - 12, 15].

На территории Прибайкалья сложились био-ценотические предпосылки для существования очагов МЭЧ и ГАЧ. Это - наличие соответствующих переносчиков (клещей I. persulcatus) и резер-вуарных хозяев, общего механизма передачи с уже известными в Восточной Сибири патогенами, передающимися через укус клеща. В пользу предположения о возможном распространении на данной территории возбудителей МЭЧ и ГАЧ говорит и тот факт, что 14,6% случаев сезонных лихорадок у больных, находившихся на лечении в инфекционной больнице города Иркутска после укусов клещей, оставались нерасшифрованными. Таким образом, актуальность проведения поисковых исследований на наличие очагов МЭЧ и ГАЧ в Прибайкалье не вызывает сомнений.

Материалы и методы

На присутствие антител к возбудителям МЭЧ и ГАЧ проанализировано 644 пробы сыворотки крови больных из Иркутской области с острыми лихорадочными заболеваниями неясной этиологии, возникшими в различные сроки после присасывания клещей. На наличие ДНК эрлихий и анаплазм исследовано 139 клещей I. persulcatus.

Для обнаружения ДНК эрлихий и анаплазм использовали праймеры: EhrI2 for-5'-AGA ACG AAC GCT GGC GGC AAG C-3'; EhrI4 rev-5'-CGT ATT ACC GCG GCT GCT GGC A-3', - амплифицирующие фрагмент ДНК длиной 450 - 500 п.н. ДНК в образцах клещей выявляли также с помощью двухраундовой ПЦР с использованием родоспецифичных прай-меров из области гена 16S рРНК. Видовую принадлежность и генетические варианты выявленных возбудителей определяли как при проведении ПЦР с использованием праймеров, специфичных для A. phagocytophilum и E. muris, так и посредством анализа нуклеотидных последовательностей продуктов ПЦР [11].

Полученные ампликоны очищали с помощью GFX-колонок (Amercham Biosciences, USA). Определение нуклеотидных последовательностей проводили с помощью набора DNA Sequencing Kit Big Dye v.3.1 (AppIied Biosystems, США) в соответствии с инструкцией производителя. Анализ продуктов реакции проведен с использованием автоматического анализатора ДНК модели ABI 310 (AppIied Biosystems, США) в Центре секвенирова-ния ДНК СО РАН, Новосибирск. Анализ последовательностей проводили с помощью программ BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) и CLUSTALW (http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/). Филогенетический анализ осуществляли с помощью программы MEGA 3.1 [14]. Кроме того, ДНК эрлихий и анаплазм выявляли методом ПЦР с использованием коммерческой тест-системы GenePak (Biokom, Россия).

Для обнаружения иммуноглобулинов классов M и G к возбудителям МЭЧ и ГАЧ использовали ИФА с диагностическими тест-системами производства ООО «Омникс» (Санкт-Петербург). Для экспресс-индикации антигена вируса КЭ в клещах и крови людей применяли ИФА. Исследование проводили согласно инструкции производителя тест-системы (ФГУП НПО «Микроген», Томск). Результаты ИФА учитывали на спектрофотометре ELx800 (BIO-TEK Instruments, USA) при длине волны 450 нм. Наличие антител к возбудителю ИКБ осуществляли с помощью НРИФ или ИФА. Для постановки НРИФ использовали диагностикумы НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (Москва) и НПО «Вирион» (Томск). Определение IgM- и IgG-антител в ИФА осуществляли с помощью тест-систем «ЛаймБест» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирская область) и «Боррелиоз-ИФА-комби», «Боррелиоз-ИФА-скри-нинг» (ООО «Омникс», Санкт-Петербург) по инструкции производителя.