Значение дополнительного надзора за полиовирусом для программы ликвидации полиомиелита

18.10.2007

При выборе методов для целей глобальной программы ликвидации полиомиелита эксперты ВОЗ учитывали возможность использования эффективных методов в лабораториях различного технического уровня. Исходя из этого, для проведения надзора за полиовирусом с помощью исследования сточных вод были рекомендованы два метода: концентрирование с помощью двухфазного разделения и сорбция на макропористом стекле [7]. Несмотря на широкие возможности детекции вирусов с помощью молекулярных методов, программа ликвидации полиомиелита рекомендует использование клеточных культур RD и L20B для обнаружения полиовируса и последующую идентификацию с помощью методов, одобренных ВОЗ [35, 7, 8]. Выбор именно этих из нескольких культур, высокочувствительных для широкого спектра энтеровирусов, например культуры клеток Hep-2, BGM [19, 34], определен направленностью исследований на детекцию полиовируса - культура клеток RD наиболее чувствительна, а L20B обеспечивает селективное выделение полиовируса. Дикий полиовирус (или значительно дивергировавший вакцинно-родственный полиовирус) в сточных водах может быть замаскирован другими цитопа-тогенными энтеровирусами, а в странах, применяющих живую полиомиелитную вакцину, - штаммами - производными ОПВ. Пониженная способность аттенуированных штаммов вируса полиомиелита размножаться при температуре 40 оС (маркирующий признак rct/40-) была успешно использована в Израиле для направленной и быстрой детекции дикого полиовируса [33, 34] и значительно дивер-гировавшего вакцинно-родственного вируса [46] в сточных водах при отсутствии клинических случаев полиомиелита. Концентраты сточных вод культивировали на клетках L20B, затем пассировали на культуре BGM при температуре 40 оС. Широкое использование такого подхода ограничивается необходимостью иметь инкубаторы с хорошо контролируемой температурой [24]. Для выявления «молчаливой» циркуляции эндемичного дикого полиовируса типа 1 в Колумбии (в то время, когда случаи полиомиелита, связанные с диким вирусом, уже не выявлялись) были исследованы сточные воды на территории высокого риска. Дикий поли-овирус был амплифицирован непосредственно в образцах сточных вод с помощью ПЦР с генотип-специфическими праймерами [49]. В странах, сертифицированных как свободные от полиомиелита, при «слепом» поиске диких полиовирусов с неизвестным генотипом такой подход вряд ли может быть применим.

Развитие молекулярных методов детекции и идентификации полиовируса может значительно ускорить его выявление, что очень важно для целей программы ликвидации полиомиелита. Поэтому ВОЗ разработала новый алгоритм исследований, с помощью которого будет возможно изучение вирусных изолятов в ПЦР при появлении цитопа-тогенного эффекта на клетках L20B для одновременного определения серотипа и внутритиповой дифференциации [38]. Апробация этого алгоритма показала, что время лабораторного исследования может быть сокращено наполовину. Однако данный подход будет возможен только в лабораториях, включенных в глобальную лабораторную сеть ВОЗ по полиомиелиту, которые ВОЗ обеспечивает необходимыми стандартизованными реагентами.

Длительные систематические исследования сточных вод популяции, выбранной с учетом эпидемиологических данных, дают важнейшие сведения для программы ликвидации полиомиелита. В Израиле и на территории Палестинской автономии с 1989 по 1997 год сточные воды отбирали в 25 - 30 местах (страна свободна от дикого полиовируса с 1988 г.). Из 2994 проб 17, отобранных на четырех территориях, содержали дикие полиовирусы типов 1 и 3. Эти находки были обоснованно трактованы как «молчаливые» вспышки. Они подтвердили возможность циркуляции диких полиовирусов в популяции с высоким уровнем охвата иммунизацией и хорошо организованным надзором за ОВП [34]. Аналогичные данные были получены в Финляндии в 1984 - 1985 годах во время вспышки полиомиелита, вызванного диким вирусом типа 3: вирус выделяли в сточных водах нескольких провинций, в которых паралитические случаи не были зарегистрированы [27]. В Египте, который пока остается эндемичной по полиомиелиту страной, целевая программа исследования сточных вод была инициирована в 2001 году, в это время там было зарегистрировано пять случаев заболевания [21]. Целью исследований было выявление резервуаров дикого полиовируса среди

«молчащих» регионов для того, чтобы принять соответствующие меры по надзору и иммунизации. В течение года было собрано 130 образцов сточных вод, дикий полиовирус типа 1 присутствовал в 57% из них. Положительные образцы охватывали 91% мест отбора проб, причем только в двух регионах были зарегистрированы случаи полиомиелита. Выделенные полиовирусы относились к трем генетическим вариантам местного генотипа полиовируса, но только один из них был выявлен при надзоре за ОВП. Исследования в Египте продемонстрировали большую чувствительность надзора за полиовирусом в окружающей среде, чем надзора за ОВП. Полученные результаты инициировали проведение программ по дополнительной иммунизации в стране и повышение качества надзора за ОВП.

Эти наблюдения показали, что надзор за вирусом полиомиелита с помощью исследования сточных вод - чувствительный инструмент, позволяющий выявлять скрытую циркуляцию диких вирусов. О высокой чувствительности данного вида надзора свидетельствует то, что среди достаточно большого количества фактов выявления высокодивергентных вакцинно-родственных полиовирусов, изолированных от случаев полиомиелита у лиц с имму-нодефицитами, известны три случая выделения из сточных вод [29].