Молекулярно-эпидемиологические аспекты циркуляции хантавирусов на территории Липецкой области

14.04.2008

Материалы и методы

Ретроспективно (с 2002 г.) проанализированы эпидемиологические данные по заболеваемости людей ГЛПС, результаты зоологических, серологических и вирусологических исследований по видовому составу, численности и инфицированности мелких млекопитающих.

Молекулярно-генетическими методами были исследованы пробы от 163-х мелких млекопитающих семи видов, отловленных в декабре - январе 2006 - 2007 годов и сентябре - октябре 2007, а также клинические пробы крови от 12 больных ГЛПС из Липецкой области и 21 больного из Воронежской (январь - февраль 2007 г.). Пробы от грызунов и людей тестировали в ПЦР с использованием скрининговых наборов универсальных и вырожденных праймеров (ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии»). Для идентификации и генотипирования изолятов хантавирусов использовали секвенирование и ПЦР-анализ с применением видоспецифичных праймеров (для детекции вирусов Пуумала, Добрава и Тула). Положительные пробы с высокой вирусной нагрузкой, не требующие дополнительных приемов очистки после амплификации в ПЦР, были секвенирова-ны. Филогенетический анализ выявленных нук-леотидных последовательностей фрагментов S- и (или) М-сегментов осуществляли с помощью программы Mega 3.1. Сиквенсы новых РНК-изоля-тов сравнивали с геновариантами хантавирусов, выявленными нами ранее в различных регионах Российской Федерации, а также с известными, зарегистрированными в базе данных GenBank.

Результаты и обсуждение

По данным эпизоотологического мониторинга, проводимого с 2002 года, на территории Липецкой области была установлена естественная инфици-рованность хантавирусами мелких млекопитающих семи видов. С использованием ИФА (тест-система «^анта^ос-» производства ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова») хантавирусный антиген был обнаружен в легких мелких млекопитающих, отловленных на 20-ти административных территориях Липецкой области.

Анализ заболеваемости ГЛПС, результаты зоологических, серологических и вирусологических исследований с учетом биоценозов и особенностей ландшафта позволили выделить активные природные очаги хантавирусов луго-полевого и лесного типов. Численность мелких млекопитающих и количество инфицированных хантавиру-сами грызунов в межэпизоотический период с 2002 по 2005 год, превышающие среднеобластные значения, регистрировались в Добринском, Липецком, Усманском, Задонском, Измалковском и Краснинском районах.

В конце 2006 года во время обострения эпизоотической ситуации были выявлены: значительный подъем численности грызунов всех видов, выраженное доминирование в традиционных отловах рыжей полевки и полевой мыши, высокая инфици-рованность хантавирусами доминирующих видов носителей. Во время вспышки ГЛПС заболеваемость была отмечена на 11-ти административных территориях, при этом большинство случаев было зарегистрировано в шести районах, расположенных в юго-восточной части области (граничащих с Воронежской и Тамбовской областями).

В Усманском районе максимальный уровень инфицированности хантавирусами был зарегистрирован у рыжей полевки (70%) и полевой мыши (37%); в Добринском - наибольший уровень инфи-цированности был выявлен у полевых мышей (67%). Число заболевших людей в этих районах во время вспышки ГЛПС составляло 84% от общего числа заболевших, при этом 167 человек были жителями Добринского района и 32 - Усманского.

При исследовании 163 проб (легочных суспензий) от мелких млекопитающих с использованием молекулярно-генетических методов в 91 пробе от полевой мыши (46), лесной мыши (16), рыжей полевки (24), обыкновенной полевки (3) и бурозубки (2) выявлялась РНК хантавирусов.