Лабораторная характеристика ослабленных вариантов отечественных штаммов вируса краснухи, адаптированных к культуре клеток Vero

10.08.2008

Испытание на общую безопасность адаптированных вариантов штаммов проводили на самках белых мышей весом 15 - 20 г. На пул вируса брали по 20 животных. ВСМ вводили по 1,0 мл внутрибрюшинно. Период наблюдения составлял 21 день. В опытах на самках морских свинок весом 350 - 400 г ВСМ вводили по 5,0 мл внутрибрю-шинно. На пул вируса брали по пять голов. Период наблюдения - 42 дня.

Электронная микроскопия.

Культуральную вируссодержащую жидкость исследовали под электронным микроскопом JEM-100 SX (JEOL, Япония) методом негативного контрастирования. В качестве контрастирующего агента применяли 2% раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты (рН 7,0). Препараты просматривали и фотографировали при инструментальном увеличении х58 000-100 000 и ускоряющем напряжении 80 кВ.

Результаты и обсуждение

Штаммы С-77 и С-74 были выделены и пассированы в течение длительного периода времени в культуре клеток Vero. Штамм С-77 прошел 34 пассажа при температуре 35 оС и дополнительно 14 пассажей при 33 оС; штамм С-74 - 44 пассажа при 35 оС и 16 пассажей при 33 оС. В процессе культивирования штаммов отмечено, что на ранних пассажах они не вызывали дегенерации клеток Vero и RK-13, тогда как аттенуированный штамм RA 27/3, взятый в виде вакцины без предварительной адаптации, проявлял четкое цитопатическое действие на клетки RK-13. В этой культуре цитопа-тическая активность выделенных штаммов начала выявляться в низких титрах (1,0 - 3,6 lg ТЦД50/мл) на 5-м, 6-м, 9-м пассажах. По мере пассирования цитопатическая активность вирусов повышалась и на 21 - 30-м пассажах достигала 5,5 lg ТЦД50/мл (табл. 1).

Таким образом, в процессе адаптации в культуре клеток Vero штаммы приобрели свойство вызывать четкую дегенерацию клеток RK-13 и по этому признаку проявили сходство с вакцинным штаммом RA 27/3. Ряд исследователей связывают указанный признак с аттенуацией вируса краснухи [10, 16, 17].

Изучение способности образовывать бляшки в культуре RK-13 под агаровым покрытием показало, что это свойство выявилось на 5-м и 6-м пассажах адаптации штаммов к клеткам Vero. Было установлено, что в последующих пассажах выделенные штаммы, а также RA 27/3 и М-33 обладали бляшкообразующей активностью в титрах, которые варьировали от 4,7 х 104 до 2,2 х 106 БОЕ/мл. Отмечено, что штаммы С-77 и С-74 формировали бляшки размером 2,0 - 3,0 мм в диаметре, которые проявлялись на 6 - 10-е сутки после заражения. Бляшки, образованные штаммом RA 27/3, были таких же размеров, но характеризовались большей прозрачностью и четкостью. У штамма М-33 размеры бляшек были не более 1,5 - 2,0 мм в диаметре.

При изучении гемагглютинирующих свойств штаммов, выделенных и культивируемых в клетках Vero, отмечено, что гемагглютинирующая активность выявлялась ранее, чем бляшкообразующая и цитопатическая. Гемагглютинирующая активность начала обнаруживаться уже на 1-м, 6-м пассажах. Титры гемагглютинирующей активности штамма С-77, пассированного при 35 оС, варьировали от 8 до 32 ГЕ/0,2 мл, штамма С-74 - от 4 до 16 ГЕ/0,2 мл. У штаммов, пассированных при 33 оС, гемагглютинин определялся в титрах, равных 4 и 2 ГЕ/0,2 мл соответственно. Установлено, что на одну ГЕ приходилось от 5,0 х 102 до 6,0 х 104 БОЕ (штамм С-77) и от 1,1 х 104 до 9,1 х 104 БОЕ (штамм С-74).