Лабораторная характеристика ослабленных вариантов отечественных штаммов вируса краснухи, адаптированных к культуре клеток Vero

10.08.2008

Таким образом, серологически подтверждена идентичность выделенных высокоадаптированных штаммов, вакцинного, а также референс-штамма гемагглютинирующему антигену, являющемуся основным иммуногеном вируса краснухи, индуцирующим образование антител, тормозящих гемаг-глютинирующую активность и нейтрализующих инфекционность вируса краснухи.

Выделенные штаммы на высоких пассажных уровнях изучали в электронном микроскопе. Во всех препаратах были обнаружены вирионы, имевшие структуру, типичную для вируса краснухи. Они были шаровидной формы с диаметром 50 - 80 нм. На поверхности вирионов отчетливо выявлялись гемагглютинины (рис. 1).

Антигенные свойства штаммов в иммунологическом маркерном тесте на кроликах изучены в процессе адаптации вируса в культуре клеток на разных пассажных уровнях.

Штамм С-77 исследован на 5-м, 21-м, 32-м пассажах, культивируемых при 35 оС, а также на 44-м пассаже (34 пассажа при 35 оС и 10 пассажей при 33 оС) и на 48-м пассаже (34 пассажа при 35 оС и 14 пассажей при 33 оС). Штамм С-74 изучен на 7-м, 30-м, 43-м пассажах (35 оС), на 54-м пассаже (44 пассажа при 35оС и 10 пассажей при 33 оС) и 60-м пассаже (44 пассажа при 35 оС и 16 пассажей при 33 оС).

Штаммы исследованы в иммунологическом маркерном тесте на кроликах в модификации Linnemann et al. (1974 г.). Авторы предложили этот тест для дифференциации «диких» изолятов вируса краснухи и аттенуированного вакцинного штамма RA 27/3 при внутривенном введении. Нами изучены антигенные свойства штаммов как при внутривенном, так и при интраназальном методе введения животным (табл. 4). Испытанные на 5-м и 7-м пассажах штаммы индуцировали образование антител к вирусу краснухи при обоих методах иммунизации. Антитела появлялись через 2 - 4 недели, достигали максимальных титров через 4 - 8 недель после введения ВСМ и персистирова-ли в течение 12 недель (срок наблюдения).

Сыворотки к штаммам Титры антител
антигены гемагглютинирующих штаммов
С-77 нативный С-74 нативный RA 27/3 твин-80 эфир. С-44 18 сер.**** твин-80 эфир.
С-77 32 пас.* 256 256 256 256
С-77 48 пас.** 256 256 256 256
С-74 43 пас.* 128 128 128 128
С-74 60 пас.** 128 Н.д. 128 128
RA 27/3*** 1024 512 1024 1024
Референс-штамм М-33*** 128 128 128 256
Международный стандарт краснушных антител 67/182 64 64 64 64
Лабораторный стандарт краснушных антител, человеческая донорская 46-я сер. 256 256 256 256
Неиммунная сыворотка кролика < 8 < 8 < 8 < 8

* Иммунные сыворотки кроликов, полученные после однократной иммунизации внутривенно на 50-й день ** Иммунные сыворотки кроликов, полученные после однократной иммунизации внутривенно на 42-й день *** Гипериммунная кроличья сыворотка после трех иммунизаций

**** Антиген вируса краснухи, авторский штамм С-44, сер. 18, апробирован в ГИСК им. Л.А. Тарасевича

Таблица 3. Идентификация гемагглютинирующих антигенов высокоадаптированных и лабораторных штаммов вируса краснухи в перекрестной РТГА при использовании иммунных штаммовоспецифических сывороток и стандартов краснушных антител