Лабораторная характеристика ослабленных вариантов отечественных штаммов вируса краснухи, адаптированных к культуре клеток Vero

10.08.2008

При внутривенном введении штамма С-74, взятого на 54-м и 60-м пассажах, низкие уровни антител выявлялись через 3 недели после иммунизации. У 50% кроликов, иммунизированных инт-раназально вирусом 54 пассажей, сероконверсия не выявлена. Среди животных, получивших вирус 60-го пассажа, только у одного отмечено кратковременное появление антител в титре, равном 8.

По иммунологическому маркерному тесту штаммы, высокоадаптированные к культуре клеток, отличались от «диких» штаммов на ранних пассажах. Четко определилась тенденция к снижению антигенной активности для кроликов при внутривенной и интраназальной иммунизации. Высокоадаптированные варианты оказались более сходными по этому признаку с вакцинным штаммом RA 27/3. Как показали наши исследования, при внутривенном введении краснушной живой вакцины (штамм RA 27/3) у двух кроликов отмечено однократное (через 2 и 6 недель после иммунизации) быстро проходящее появление антител к вирусу краснухи в низких концентрациях (1:16). У животных, иммунизированных интраназально, вирус-специфических антител не обнаружено.

Представленные результаты полностью согласуются и подтверждают данные, имеющиеся в литературе, о низкой иммунологической активности вакцинного штамма и высокой антигенности «диких» штаммов на ранних пассажах в маркерном тесте на животных [11, 13 - 15, 19].

При испытании на животных на общую безопасность пулов, приготовленных из высокоадаптированных ослабленных отечественных штаммов вируса краснухи, определена 100%-ная выживаемость белых мышей (80 голов) и морских свинок (20 голов), что свидетельствовало об отсутствии токсичности вируссодержащих пулов.

Выводы

В процессе адаптации вируса краснухи к линии клеток Vero, сочетавшейся с культивированием при пониженной температуре, получены варианты отечественных штаммов, которые характеризовались стабильной репродукцией вируса, достигавшего титров, равных 105 - 106 БОЕ/мл, и обладавшего гемагглютинирующей активностью, варьировавшей от 2 до 32 ГЕ/0,2 мл.

Отмечено на животных изменение свойств этих штаммов в сторону повышения цитопатической, бляшкообразующей активности и снижения анти-генности. Методом электронной микроскопии в препаратах штаммов выявлены типичные для вируса краснухи вирионы. Серологическими тестами (РТГА и РН) подтверждены подлинность и специфичность адаптированных штаммов на высоких пассажных уровнях. Тестами на общую безопасность на лабораторных животных определено отсутствие токсичности вируссодержащих пулов.

Установлено, что адаптированные варианты отечественных штаммов приобрели различия со свежевыделенными «дикими» штаммами и сходство с аттенуированным вакцинным штаммов Wistar RA 27/3. Представлены экспериментальные доказательства получения ослабленных вариантов отечественных штаммов (повышение цитопатической активности в культуре клеток RK-13 и снижение антигенности для лабораторных животных - иммунологический маркер).

Получение ослабленных вариантов вируса краснухи на основе авторских отечественных штаммов открывает возможности их использования при конструировании медико-биологических препаратов для профилактики краснухи, а также при изготовлении диагностикумов.