Изучение показателей иммунитета при вакцинации против гепатита В

20.10.2008

Известно, что CD4+ Т-лимфоциты при ВГВ-инфекции распознают главным образом HBsAg, который является протективно значимым - антитела к нему обладают вируснейтрализующими свойствами и способствуют элиминации вируса из организма [7].

Целью данной работы является оценка напряженности гуморального иммунитета и состояния клеточного иммунитета методом Elispot через пять лет после полного курса вакцинации против гепатита В.

Материалы и методы

Группы вакцинированных. К обследованию были привлечены сотрудники ФГУН «ГНЦ ВБ «Вектор» (Новосибирская область, пос. Кольцово), иммунизированные: вакциной Engerix (полный курс вакцинации - три инъекции) в 2002 году - 58 человек; вакциной Шанвак-В (две инъекции) в 2007 году - 7 человек; вакциной Engerix (полный курс) в 2002 году и вакциной Шанвак-В (одна инъекция) в 2007 году - 4 человека. Также были обследованы медицинские работники (21 человек) из онкологического отделения городской больницы и муниципального роддома (г. Новосибирск), иммунизированные полным курсом вакцины Engerix в 2002 году. Контрольную группу составили пять человек, не получавшие вакцины против гепатита В и не имеющие серологических маркеров этой инфекции.

Проведение данной работы было одобрено этическим комитетом ФГУН «ГНЦ ВБ «Вектор». Исследование проводили с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан (Указ Президента РФ от 24.12.1993 г. № 2288, федеральные законы от 2.03.1998 г. № 30-ФЗ и от 20.12.1999 г. № 214-ФЗ). Опрос и взятие образцов крови проводили только после получения письменного информированного согласия [10].

Сбор образцов и получение мононуклеа-ров периферической крови. Образцы цельной крови собирали в пробирки Vacutainer, содержащие К3-ЭДТА (BD Biosciences, Сан-Диего, США). Из крови методом градиентного центрифугирования с применением Histopaque-1077 (Sigma diagnostics, США) выделяли мононуклеарные клетки для использования в реакции Elispot с целью определения HBsAg-специфической продукции ИФН-у моно-нуклеарами. Полученные мононуклеары дважды отмывали, ресуспендировали в среде культивирования (среда RPMI 1640, 2 мМ L-глютамина, ген-тамицин 80 мг/л, 10% эмбриональной сыворотки), их концентрацию доводили до 5 х 105 клеток/мл и использовали в реакции. Определение серологических маркеров ВГВ в плазме крови проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Иммуноферментный анализ. Серологические маркеры ВГВ (HBsAg, анти-HBcor) определяли методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем ЗАО «Вектор-Бест»: «Вектогеп В-HBs-антиген», «ВектоHBcorAg-антитела». Концентрацию анти-HBs определяли с помощью тест-системы «ВектоHBsAg-антитела» того же производителя.

Протективным считали уровень анти-HBs > 10 МЕ/л [16, 19]. Этот критерий определен Приказом Мин-здравмедпрома и Госкомэпиднадзора России от 3.06.1996/21.05.1996 г. № 226/79 «О введении профилактических прививок против гепатита B».