Милиацин предотвращает депрессию иммунитета к столбнячному анатоксину

17.02.2009

Для иммунизации животных использовали обогащенный столбнячный жидкий анатоксин (АС), сорбированный на гидроокиси алюминия, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗиСР РФ (серия 197-5; контрольный номер 2421; срок годности -до августа 2008 г.). Мышей иммунизировали подкожно в надлопаточную область разовой дозой 0,5 мл, содержащей 10 ЕС столбнячного анатоксина, с повторным введением антигена в той же дозе на 28-е сутки после первичной иммунизации. Оценка иммунного ответа у животных всех четырех групп проводилась на 14-е и 31-е сутки после реиммунизации (соответственно на 4-е и 21-е сутки после введения МТ) путем определения титра антител микрометодом РНГА с использованием диагностикума эритроцитарного столбнячного антигенного жидкого - комплект № 1 (предприятие-изготовитель - АООТ «Биомед» им. И.И. Мечникова; активность 1:1280; серия 2; дата изготовления -сентябрь 2007 г.).

Для воспроизведения супрессивного воздействия на поствакцинальный иммунитет использовали МТ австрийской фирмы «Эбеве» (серия 700045; срок годности - до декабря 2009 г.). Препарат вводили на 10-е сутки после повторной иммунизации однократно внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг массы тела. Основанием для выбора дозы и способа введения МТ послужили данные авторов [18, 19], использовавших однократное внутрибрюшинное введение 20 мг/кг цитоста-тика при воспроизведении токсического поражения печени у крыс. Однако проведенное нами предварительное испытание этой дозы на мышах (СВА х С57Bl6)F1 в двух сериях опытов (рис. 2; серии I и II) показало высокую летальность животных, составившую на протяжении 14 дней 85 и 65%. Аналогичный способ применения МТ в дозе 10 мг/кг массы тела приводил к ослаблению летального эффекта - от 20 до 8,3% (см. рис. 2; серии III и IV), в связи с чем эта доза цитостатика (10 мг/кг) и была выбрана для проведения дальнейших экспериментов.

Для оценки влияния милиацина на супрессию поствакцинального иммунитета под действием МТ тритерпеноид вводили трехкратно внутрибрюшин-но в дозе 2 мг/кг массы тела: через час после введения МТ и в последующие два дня. Доза три-терпеноида и кратность его введения соответствовали тем, при которых в ранее проведенных исследованиях достигался положительный эффект, в том числе снижение выраженности морфологических нарушений в органах иммуногенеза на фоне применения МТ [2].

Динамика гибели мышей

Рисунок 2. Динамика гибели мышей (СВА х C57Bl6)F1 при однократном внутрибрюшинном введении метотрексата в дозах 20 мг/кг и 10 мг/кг массы тела

Lg титров антител в сыворотке крови мышей

Рисунок 3. Lg титров антител в сыворотке крови мышей (СВА х С57В1,)Р1 на 14-е сутки после повторной иммунизации столбнячным анатоксином (I), а также после аналогичной иммунизации с последующим (на 10-е сутки) введением МТ (II), МТ и растворителя (III), МТ и милиацина (IV)

Статистический анализ полученных данных проводили стандартными методами вариационной статистики. Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Полученные результаты представлены на рисунках 3 и 4, отражающих средние значения десятичных логарифмов титров антител, выявленных на 31-е сутки после повторной иммунизации столбнячным анатоксином (I), а также после аналогичной иммунизации с последующим (на 10-е сутки) введением МТ (II), МТ и растворителя (III), МТ и милиацина (IV)