Разработка отечественной живой аттенуированной вакцины против краснухи на основе штамма «Орлов» (экспериментальные исследования)

06.06.2010

3. Иммунологическая безопасность штамма «Орлов-В»

Она определена по показателям функциональной активности иммунокомпетентных клеток иммунизированных животных и их интерфероново-му (ИНФ) статусу. Спустя 7 - 28 суток после иммунизации у привитых животных определилась тенденция к активации натуральных киллеров, а также маркеров В-клеточного звена иммунитета. Через 14 суток после вакцинации у всех иммунизированных животных отмечали 4 - 8-кратное снижение уровня альфа- и гамма-ИФН. Через 28 - 45 суток после иммунизации количественные показатели активности иммунокомпетентных клеток и уровня ИФН возвращались к исходным величинам и не отличались от них более чем в 1,5 раза. Иммунологические сдвиги в системе врожденного иммунитета в группе плацебо (неиммунизирован-ные обезьяны) не наблюдались.

Заключение об иммунологической безопасности штамма «Орлов-В» сделано на основании полученных результатов и критериев, перечисленных в СП 3.3.2.561-96:

  • продолжительность изменений иммунологических показателей не должна превышать 45 дней с момента введения вакцины;
  • изменения величины показателей численности и функциональной активности иммунокомпе-тентных клеток не должны отличаться более чем в 1,5 раза от исходных и аналогичных показателей в группе, получавшей плацебо и обследованной в те же сроки.

Технологические подходы к получению краснушной вакцины

Изучена возможность использования более технологичного тканевого субстрата для получения вакцины против краснухи. Выбор диплоидной линии клеток-фибробластов кожно-мышечного лоскута эмбриона человека «М-22» определен следующим:

  1. Чувствительность диплоидной линии «М-22» к вакцинному штамму «Орлов-В» соответствует чувствительности первичной культуры клеток ППК, к которой адаптирован указанный штамм. Средние показатели инфекционной активности вируса в первичной (ППК) и диплоидной («М-22») культурах клеток составляют 3,9 lg ТЦД50/мл и 4,2 lg ТЦД50/мл соответственно.
  2. Линия клеток «М-22» сертифицирована в ГИСК им. Л.А. Тарасевича как субстрат, пригодный для получения живых противовирусных вакцин.
  3. Имеется банк посевных клеток «М-22». Установлено, что:
    • диплоидная линия «М-22» способна поддерживать стабильный уровень инфекционной активности вируса краснухи на протяжении не менее пятнадцати пассажей линии в фазе активного роста;
    • клетки «М-22» поддерживают репродукцию вирусов кори (4,0 - 6,0 lg ТЦД50/0,5 мл) и эпидемического паротита (4,0 - 5,0 lg ТЦД50/0,5 мл), что создает возможность получения препарата тривакцины (корь-паротит-краснуха) на едином тканевом субстрате;
    • клетки «М-22» устойчивы к криоконсервации, культивируются при использовании отечественных питательных сред и реагентов;
    • характер репродукции восстановленного штамма «Орлов» в клетках «М-22» позволяет получить удвоенное количество полезных вирусных сборов с существенно меньшим содержанием остаточного белка в конечном продукте, чем при использовании первичной культуры клеток;
    • генетическая стабильность штамма «Орлов» (определена по гену Е1) сохраняется на протяжении как минимум пяти пассажей вируса в культуре клеток «М-22»;
    • культивируемый на диплоидной линии клеток «М-22» вариант штамма «Орлов» характеризуется стабильными показателями инфекционной активности на протяжении как минимум 15 лет хранения (срок наблюдения) при температуре минус 20 оС.

Устойчивость штамма «Орлов» к длительному хранению и наличие банка посевных клеток «М-22» - эти два фактора определяют возможность многолетнего производства краснушной вакцины в России в необходимых количествах.