Разработка отечественной живой аттенуированной вакцины против краснухи на основе штамма «Орлов» (экспериментальные исследования)

06.06.2010

Молекулярно-генетические исследования штамма «Орлов-В»

Генотипирование штамма «Орлов-В» и ряда изо-лятов вируса краснухи, выделенных на территории страны (в Пермском крае), проведено в соответствии с рекомендациями ВОЗ (2005 г.).

Установлено следующее:

  • вакцинный штамм вируса краснухи «Орлов-В» относится к генотипу 2С, эндемичному для России, и генетически более близок к циркулирующим на ее территории изолятам вируса краснухи, чем вакцинный штамм Wistar ЯА27/3: индекс генетической близости составляет 0,74 и 0,99 соответственно;
  • вакцинопрофилактика краснухи вызывает филогенетические изменения возбудителя. Массовая туровая иммунизация вакциной Rudivax детей 1 - 2-го года жизни в г. Перми в течение четырех лет применения при пороге привито-сти, равном 460,0 на 1000 детского населения, привела к достоверному повышению показате-

ля генетической дивергенции с 1,15% в 2000 до 3,14% в 2004 году; различие между исследованными штаммами «Орлов-В» и Wistar RA27/3 - в высококонсервативном участке молекулы Е1, ответственном за поливалентность иммуногенной активности вируса. Полученные результаты свидетельствуют о возможном преимуществе применения штамма «Орлов-В» для профилактики краснухи в условиях популяционной изменчивости возбудителя.

Выводы

  1. В доклиническом изучении на обезьянах макака-резус выявлено, что штамм «Орлов-В» не обладает остаточной нейровирулентностью, контагиозностью и по параметрам специфической безопасности соответствует требованиям, предъявляемым к штаммам для живых противовирусных вакцин.
  2. Однократное введение серонегативным к краснухе обезьянам макака-резус препарата из штамма «Орлов-В» вызывает 100%-ную серокон-версию и формирование вирус-специфических антител в высоких титрах (в РТГА 1:160 -1:1280). Препарат из штамма «Орлов-В» обладает протективностью, защищая иммунизированных животных от заражения патогенным вирусом краснухи (штамм «Лебедев»), и характеризуется иммунологической безопасностью. По изученным параметрам восстановленный штамм «Орлов» не уступает препарату сравнения - вакцинному штамму вируса краснухиWistar RA27/3.
  3. Диплоидная линия клеток «М-22» - тканевой субстрат, пригодный для использования в производственных целях: не требует специальных условий культивирования; устойчива к криокон-сервации; характеризуется стабильной чувствительностью к вирусу краснухи, а также к вирусам кори и эпидемического паротита.
  4. Культивирование штамма «Орлов» на линии клеток «М-22» не сопровождается мутациями в гене Е1 на протяжении как минимум пяти пассажей вируса в клетках.
  5. Лиофилизированный штамм «Орлов-В» характеризуется стабильной биологической активностью (3,5 - 3,8 lg ТЦД50/0,5 мл) в условиях хранения при температуре - 20 оС на протяжении 15 лет наблюдения. Это обстоятельство, а также наличие банка посевных клеток «М-22» позволяют обеспечить многолетнюю потребность в вакцине против краснухи на территории РФ.
  6. Проведенное молекулярно-генетическое исследование выявило возможное преимущество применения штамма «Орлов-В» для профилактики краснухи в нашей стране
  7. В целом полученные результаты свидетельствуют о возможности создания живой аттенуиро-ванной вакцины против краснухи на основештамма «Орлов-В» и диплоидной линии клеток «М-22» и о целесообразности ее применения на территории России.