Результаты применения метода полимеразной цепной реакции

01.11.2010

В.Ю. Тетерин1 (voltair_777@yahoo.com), Э.И. Коренберг2 (ekorenberg@stream.ru), В.В. Нефедова2 (valentinnef@mtu-net.ru), Н.Н. Воробьева1 (infect-perm@mail.ru), В.И. Фризен3 (infect-perm@mail.ru)

1 ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера» Росздрава

2 НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва

3 ГУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница», г. Пермь

Резюме

Проведена диагностика иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) у 251 пациента, находившегося на лечении в краевой инфекционной больнице г. Перми в весенне-летний период 2007 года с острыми лихорадочными заболеваниями после присасывания клещей. Исследованы 634 пробы крови методом «nested» ПЦР с родоспецифичными праймерами Borrelia burgdorferi sensu lato (Bb23SN1 - Bb23SC1 и IGSbl - IGSa2), фланкирующими участок 5S - 23S rPHK-спейсера, в динамике заболевания. Определены оптимальные сроки (8 - 14-й день от начала заболевания) детекции ДНК боррелий в крови пациентов. Установление диагноза ИКБ с помощью ПЦР у 57,5% пациентов с эритемной и безэритемной формами позволяет использовать этот метод в качестве дополнительного в лабораторной диагностике заболевания.

Ключевые слова: иксодовые клещевые боррелиозы, полимеразная цепная реакция, диагностика

Введение

В лесной зоне Прикамья, преимущественно в южно-таежных и хвойно-широколиственных лесах, широко распространены очаги иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ). Заражение обусловлено Borrelia garinii и Borrelia afzelii [2, 23].

Значительное увеличение числа выявляемых случаев ИКБ в Пермском крае, подтверждающее экспертный прогноз в отношении истинных показателей заболеваемости в этом регионе, во многом связано с совершенствованием методов лабораторной диагностики [4, 5]. Их условно можно подразделить на непрямые - серологические тесты (ИФА (имму-ноферментный анализ), РНИФ (реакция непрямой иммунофлюоресценции), иммунный блоттинг) и прямые - направленые на детекцию возбудителя, его антигенов или ДНК (культуральный метод, прямая микроскопия и ПЦР).

В США и Европе при экспресс-диагностике ИКБ для ИФА сывороток крови пациентов широко применяют рекомбинантные антигены (синтетические пептиды). Зачастую после ИФА используют иммуно-блоттинг. Эти методы обладают высокой специфичностью и чувствительностью [39]. Однако, несмотря на все достоинства серологических исследований, ни одна из известных реакций не позволяет эффективно выявлять антитела на всех этапах иммуногенеза. Позднее появление специфических иммуноглобулинов М и G, а также разная выраженность антительного ответа у больных обусловливают трудность ранней диагностики инфекции [6 - 8]. Микроскопические тесты часто не дают возможности обнаружить бор-релии из-за их низкой концентрации в исследуемом материале. Культуральный метод, который считается «золотым стандартом» диагностики, в некоторых случаях применяется для подтверждения ИКБ, но не может рассматриваться как способ экспресс-диагностики: показатель частоты изоляции невысок, а рост боррелий в посевах требует длительного времени [6 - 8, 15, 39, 41].