Результаты дополнительного изучения свойств вакцинного штамма ЭШЧ вируса кори

06.08.2011

Другой производной от линии 4647 является линия 4647 ТК. Она получена при пассировании линии 4647 на среде с 5-бромдезоксиуридином. Для заражения был использован внутрилинейный гибрид клеток (РАМТ Х4647 ТК) 6-го, 9-го, 10-го, 11-го пассажей. Зарегистрированы следующие титры в той же последовательности пассажей: 5,30; 5; 4,41; 5,38 lg БОЕ/мл. При множественности заражения 0,01; 0,05; 0,1 и 0,2 на клетку разница в значениях титров была недостоверной (4,41; 4,27; 4,30; 4,38 lg БОЕ/мл). При первичном заражении характерные симпласты с вакуолизацией цитоплазмы развились на 7-е сутки, во всех следующих - на 3-и.

Параллельно проведено изучение этой линии после фиксирования и окрашивания клеток гематоксилином и эозином на 1 - 4-е сутки до момента полного разрушения клеточного пласта. Максимальный титр вируса отмечен на 3-и сутки и составил 5,38 lg БОЕ/мл при множественности заражения 0,2 на клетку. В этой серии опытов специфическое действие вируса на клетки отмечено на 2-е сутки - появились небольшие симпласты с тремя - пятью ядрами. В отдельных симплас-тах обнаружено начало вакуолизации цитоплазмы. На 3-и сутки клеточный пласт состоял из тесно прилегающих друг к другу небольших симпластов с четко выраженной вакуолизацией цитоплазмы. На 4-е сутки культура разрушилась и большая ее часть отслоилась. На оставшихся фрагментах пласта выявлены грубые повреждения клеток и наличие крупных симпластов с резко утонченной и вакуолизированной цитоплазмой. Титр в это время составил 5,00 lg БОЕ/мл.

Филогенетическое древо, эталонные штаммы генотипов вируса кори, образцы 5660, 5995; 450 нт С-концевого фрагмента N-гена

Рисунок 1. Филогенетическое древо, эталонные штаммы генотипов вируса кори, образцы 5660, 5995; 450 нт С-концевого фрагмента N-гена

Проведены опыты с применением линии 4647, полученной из банка посевных клеток 35-го пассажа. Этот банк приготовлен в 1985 году и состоит из 490 ампул по 5 млн клеток в каждой. Заражение культуры осуществлено материалом ампулы № 1238а. Проведено четыре последовательных пассажа. Вируссодержащую жидкость после заражения титровали, как всегда, на двух видах культур. Титры после первичного заражения культуры клеток 37-го пассажа составили на линии 2688С - 6,37 lg БОЕ/мл. Титры вируса на клетках линии 4647 40-го, 43-го и 44-го пассажей были 4,71; 4,84; 5,68 lg БОЕ/мл. Вируссодержащей жидкостью с титром 4,84 инокулированы клетки линии 4647 44-го пассажа разными объемами вируса - 0,1; 0,5; 1,0 и 2,0 мл, что соответствовало заражающим дозам 0,01; 0,05; 0,1; 0,2 на клетку. Титры соответственно были: 5,68; 6,3; 6,3; 6,11 lg БОЕ/мл. Увеличение объема вирусной суспензии до 2,0 мл не привело к значительному увеличению титра. Симпласты развились на 3 - 7-е сутки.

Проведены длительные опыты по изучению чувствительности линии клеток почек теленка Таурус-1 к заражению штаммом вируса кори ЭШЧ [8].