Результаты дополнительного изучения свойств вакцинного штамма ЭШЧ вируса кори

06.08.2011
№ ампул Средний титр лиофилизированного вируса Линии клеток
2688С 4647
1064 3,65 2,84*/12 4,91/5 4,90*/5 5,35/2
    5,10/6   3,27/7  
    2,84/12 3,56/2 5,02/6  
    4,90/5 5,35/2 4,60/5  
    3,27/7   4,97/7  
    5,02/6      
1146 3,69 3,87/8 5,19/3 4,95/5  
1236 3,20 3,30/9   5,54/7  
1237 3,31 4,39/5   5,56/3  
        5,84/5  
      5,17/2 5,70/2  
      5,69/6    
1238 2,89 2,67/6 4,35/3 5,42/6  
    1,69/3   5,17/6  
    5,29/7      
1238а 3,46 4,95/6 6,09/2 5,77/6  
    3,76/5 4,35/3 6,37/7  
    3,76/5 4,14/7    
    2,67/4 4,02/4    
    4,14/4      
1494 3,24 6,04/5      
    3,62/12      
    3,62/12 4,47/3    
1496 3,05 2,83/12 4,07/2    
  3,52 4,39/5      
1555   3,96/6 6,0/10    
    2,60/8   5,47/7  
1562 3,51 3,18/8 3,69/3    
    4,94/6      
    4,91/9      
    < 1,0/8 5,39/7    
1565 2,73 4,59/8   4,30/8  

* Числитель - титр вируса; знаменатель - сутки появления симпластов

Таблица 1. Репродукция вируса кори, штамм ЭШЧ, в клетках линий 2688С и 4647

Установлено, что эта культура тоже поддерживает репродукцию вируса, но лишь при первичном заражении.

При инокуляции клеток линии Таурус-1 60-го пассажа содержимым ампулы № 1238а через 4 - 7 суток в монослое появились отверстия округлой формы разных размеров. Постепенно их количество увеличивалось, но в промежутках между ними сохранялись участки неповрежденного монослоя, похожие на контроль. Таким образом, деструкция клеточного пласта происходила без образования симплас-тов и только на 73-и сутки культура разрушалась под действием физиологического старения клеток. Аналогичные отверстия округлой формы в монослое двух флаконов с линией Таурус-1 65-го пассажа развились при переносе вируссодержащей жидкости с линии Таурус-1 60-го пассажа. В одной из этих культур вирус при титровании не был обнаружен, а другой титр достиг лишь величины в 1,69 lg БОЕ/мл. Несмотря на результаты титрования, в монослое обеих культур зафиксированы отверстия неправильной формы - результат слияния отверстий, расположенных поблизости друг от друга. Этот феномен наблюдали и при других заражениях штаммом ЭШЧ линий клеток Таурус-1, которые проводились в разное время. При переносе вирус-содержащего материала с Таурус-1 через 16 суток после заражения в клетки линии 4647 41-го пассажа титр достиг 5,38 lg БОЕ/мл, что, вероятно, свидетельствовало о переживании штамма ЭШЧ в клетках линии Таурус-1. Дальнейшее снижение степени размножения вируса в этой линии может быть связано с тем, что нам не удалось еще подобрать оптимальных условий для размножения вируса кори в этой превосходной клеточной системе, способной сохраняться на стекле длительное время (до 2,5 месяца - срок наблюдения) без сыворотки и смены питательной среды, содержащей всего 3% аминопептида. Из такой устойчивой культуры возможно производить многократные сборы вируса или другого целевого продукта, что является выигрышным в случае производства МИБП на этих клетках.

И последнее дополнение к ранее проведенным опытам - это попытки репродукции вируса кори (штамм ЭШЧ) во взвеси клеток. Проведено 11 опытов. В колбы «Биотех М» были внесены клетки линий 4647 50-го, 52-го, 53-го пассажей, РАМТ 108, 2688С - 58-го пассажа и добавлен вирус кори из ампул № 1236, 1237, 1238, 1238а, 1255, 1262, 1265. Для учета размножения вируса изымали пробы в день заражения и в течение двух недель, в шести опытах - до 14 суток. Результаты размножения вируса сравнивали с титром внесенного вируса в день заражения (через 2 часа - период его адсорбции). Эти титры были следующими на клетках линии 4647 - 3,36; 4,2; 2,9; 4; 4,53; 4,3; 4 lg БОЕ/мл. В первых двух опытах в течение первых двух суток титр снизился на 3 и 4 логарифма. Такая же картина была во втором опыте на следующие сутки. В остальных опытах титр вируса колебался от 2,90 до 3,98 lg БОЕ/мл. На 3-и сутки зарегистрированы незначительные повышения титров (были до 7-ми суток). Во всех опытах с 10-х до 19-х суток вирус во взвеси не обнаруживался. И в данном случае тоже можно говорить лишь о переживании вируса в течение 7-ми суток.