Совершенствование иммунодиагностики хеликобактериоза

06.08.2011

Результаты и обсуждение

После проверки сывороток с препаратом I выбрали четыре сыворотки, содержащие антитела к максимальному числу антигенов. Эти сыворотки исследовали на наличие антител ко всем трем препаратам (рис. 1). При сравнении препаратов можно наблюдать заметное уменьшение количества антигенных белков в ряду «I - II - III препараты». Проверка лошадиного гемоглобина, который являлся единственным высокомолекулярным компонентом синтетической среды, на наличие антигенных белков с теми же сыворотками дала отрицательные результаты. Обращают на себя внимание невысокие уровни специфических антител в сыворотке бессимптомного донора (№ 5), что может свидетельствовать лишь о носительстве H. pylori.

Для сыворотки № 2, содержащей антитела к наибольшему числу белков, рассчитали молекулярные массы антигенных белков в трех изучаемых препаратах из H. pylori.

В таблице 1 представлены результаты расчета. Очевидно, что все препараты, кроме гемоглобина, содержат антигенные белки. Препарат I, полученный из клеток, выращенных на полноценной среде, содержит не менее 39 антигенных белков, лишь пять из которых известны как специфические. Препарат II из клеток, выращенных на синтетической среде, содержит 15 антигенных белков (из них 4 специфических). Препарат III из культуральной жидкости после выращивания H. pylori на синтетической среде содержат 9 антигенных белков (4 специфических). Таким образом, методом имму-ноблоттинга установлено, что спектр антигенных белков внеклеточного препарата, получаемого при культивировании H. pylori на синтетической среде, значительно уже, а доля в нем специфических белков выше, чем в клеточных антигенных препаратах.

Полученные антигенсодержащие препараты были использованы для оценки наличия IgG-анти-тел методом ИФА в сыворотках крови больных и бессимптомных доноров (рис. 2).

Иммуноблоттинг сывороток крови с антигенсодержащими препаратами из H. pylori

Рисунок 1. Иммуноблоттинг сывороток крови с антигенсодержащими препаратами из H. pylori:I – препарат I; II – препарат II; III – препарат III; 1 – положительная контрольная сыворотка, проверенная ранее с тест-системой «ИммуноХром-анти НР-Экспресс»; 2, 3, 4 – сыворотки от больных-носителей; 5 – сыворотка от бессимптомного донора.

Источник препарата Мол. масса белков препарата, антитела к которым обнаружены в сыворотке № 2*
Клетки H. pylori, выращенные в плотной среде Columbia с кровью 15, 16, 17, 18, 19, 20, 24, 25, 28, 30, 31, 34, 35, 39, 45, 50, 57, 60, 66, 76, 80, 84, 87, 90, 92, 93, 97, 105, 108, 111, 112, 114, 115, 117, 120, 127, 135, 147, 156
Клетки H. pylori, выращенные в жидкой синтетической среде 16, 16,5, 18, 19, 28, 30, 33, 34, 43, 45, 63, 66, 87, 123, 133
Культуральная жидкость, полученная после культивирования H. pylori в жидкой синтетической среде 16, 19, 25, 26, 28, 37, 40, 59, 66
Гемоглобин лошадиный Белки отсутствуют

* Жирным шрифтом выделены специфические антигенные белки H. pylori, известные по данным литературы

Таблица 1. Обнаружение антигенных белков в препаратах из H. pylori с помощью иммунной сыворотки № 31