Вирусная безопасность донорской плазмы и лечебных препаратов крови

06.08.2011

В настоящее время лицензированными и имеющими практическое значение являются пастеризация и стерилизация паром, а также сольвент-детергентный метод.

Тепловая обработка - способ инактивации, при котором инфектогенность вирусов ликвидируется при их тепловой денатурации. Тепловой метод инактивации вирусов в растворе белка оказался приемлемым только для альбумина. Лабильные белки, включая фактор VIII, денатурируются в растворе при нагревании до 56 0С. Простота и надежность инактивации прогревом стимулировали поиск способа пастеризации применительно к нестабильным белкам, прежде всего к факторам свертывания крови.

Инактивирующий эффект нагревания определяют: продолжительность воздействия, температура, физическое состояние белка (сухой или в растворе), содержание солей, скорость повышения температуры, свойства и концентрация стабилизаторов. Лабильные белки могут быть защищены добавлением химических стабилизаторов (аминокислоты, цитрат или сахара), но потери в 10 - 15% активности фактора VIII при этом неизбежны.

Было установлено, что тепловая обработка при 80 - 100 0С длительностью от 30 минут до 72 часов может быть применена для лиофилизированных факторов свертывания, имеет доказанный уровень инактивации как оболочечных, так и не имеющих оболочки вирусов. Прогрев при 100 0С в течение 30 минут - так называемый тепловой шок - в настоящее время включен в технологический процесс всех зарубежных производств концентратов факторов свертывания крови. Потеря активности препаратов благодаря введению стабилизаторов уменьшена, хотя и достигает 15%.

Обработка растворителем и детергентами стала методом, основанным на ином подходе к проблеме инактивации вирусов. Чтобы инфицировать клетку, вирус должен прикрепиться к клеточной мембране по принципу «замок - ключ». ВИЧ, вирусы гепатитов В и С покрыты липопротеиновой оболочкой, на которой находятся рецепторы, позволяющие прикрепиться к клетке-мишени. Разрушение этой оболочки означает лишение вируса способности к инфицированию. До начала 80-х годов прошлого столетия не удавалось отыскать вещества, которые могут привести к такому эффекту и одновременно не изменить структуру лабильных белков. Липопро-теиновые мембраны легко разрушаются детергентами, в результате чего остаются только фрагменты нуклеиновой кислоты вируса, не обладающие патогенными свойствами. Было установлено, что такой эффект достигается добавлением гидрофобного растворителя три-н-бутилфосфата в сочетании с детергентами типа холата или неанионными типа полисорбата, известными под названиями ТВИН-80 или ТРИТОН-Х-100. Присутствие детергента предотвращает также обратное соединение или регенерацию мембран. Инактивирующее действие комбинации сольвента и детергента осуществляется быстро и необратимо.

С недавних пор препараты, подвергнутые S/D-инактивации, на конечном этапе нагревают. Такая обработка расширяет спектр инактивиру-емых вирусов, включая вирусы, не содержащие в оболочке липидов (например, вирус гепатита А).

Фотохимические методы инактивации вирусов обработкой метиленовой синькой на свету используются в течение нескольких лет в Европе для инактивации цельной плазмы крови.