Вакцина против вируса клещевого энцефалита на основе европейского прототипного штамма

03.11.2011

Характеристики роста гибридов, представляющих все подтипы ВКЭ и ВОГЛ

Сохраняя последовательности, кодирующие белки вирусного каркаса, и заменяя только поверхностные белки, мы стремились добиться сходной репликационной и инфекционной активности разных гибридных вирусов в культурах клеток, что является необходимым условием для стандартизованных тестов на нейтрализующие антитела. Чтобы доказать это сходство, мы сравнили характеристики роста всех гибридов в детекторной клеточной линии А549. Кривые роста (рис. 5, А) оказались одинаковыми для всех гибридов, за исключением ВКЭ-Vasilchenko/ВЛЗН (титры этого гибрида были значительно снижены на всех сроках после заражения).

Чтобы оценить соотношение между инфекци-онностью гибридных вирусов и количеством ге-номсодержащих вирусных частиц, выходящих из инфицированных клеток, через 24, 48, 54 и 72 часа после заражения с постоянной МЗ в пробах культуральной жидкости измеряли содержание вирусной РНК методом КПЦР и титры вирусов (TCID50) и рассчитывали соотношение частиц и ин-фекционности. Это соотношение оказалось одинаковым у всех гибридных вирусов (см. рис. 5, Б).

Анализ образцов сыворотки, полученных в клинических испытаниях, с использованием гибридов ВКЭ

Для анализа уровней антител с перекрестной нейтрализующей активностью у людей, вакцинированных против КЭ, мы провели реакцию нейтрализации в 41 образце сывороток, полученных в нерандомизированном открытом исследовании безопасности и эффективности вакцины против КЭ ФСМЕ-Иммун, созданной на базе штамма Neudoerfl ВКЭ. При нейтрализационном анализе с использованием разных гибридных вирусов во всех исследованных образцах сыворотки обнаружились высокие титры нейтрализующих антител ко всем подтипам вирусов (рис. 6). Серо-позитивность в отношении штаммов Neudoerfl, К23, Sofjin НО, Oshima 5-10 и Vasilchenko составляла 100%, а в отношении гибридного штамма ВОГЛ - 98%. Статистический анализ результатов нейтрализационного анализа не выявил достоверных различий между гибридами ВКЭ/ВЛЗН, тогда как для гибридного ВОГЛ средние титры были достоверно ниже, что в значительной степени согласуется с его филогенетической отдаленностью от штамма Neudoerfl ВКЭ.

В ходе клинического исследования были проведены сравнительные исследования титров нейтрализации в отношении гибридного штамма Neudoerfl и определение титров с помощью иммунофермент-ного анализа. В этих исследованиях обнаружилась достоверная корреляция между двумя видами анализа (коэффициент корреляции Пирсона r = 0,785, Р < 0,0001). Эти данные подтверждают, что вакцина на основе европейского прототипного штамма Neudoerfl ВКЭ вызывает продукцию нейтрализующих антител против штаммов европейского, дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ с одинаковыми титрами. Кроме того, появляются высокие титры нейтрализующих антител против менее родственного изолята группы клещевых инфекций млекопитающих - ВОГЛ.

Кинетика роста и инфекционность гибридных ВКЭ

Примечание: A. Кинетику роста гибридных вирусов ВКЭ-Nd/ВЛЗН, ВКЭ-К23/ВЛЗН, BKS-Sofjin НО/ВЛЗН, ВКЭ-Oshima 5-10/ВЛЗН, ВКЭ-\Vasilchenko/ВЛЗН и ВКЭ-Omsk HF/ВЛЗН анализировали в культурах клеток А549, инфицированных с МЗ 0,0001. В пробах культуральной жидкости, взятых в указанные сроки после заражения, определяли титры вирусов с помощью методики оценки медианы инфекционной дозы для культуры ткани (ТСID50 для клеток А549.

Б. Для оценки соотношения между количеством частиц гибридных вирусов и их инфекционностью в пробах культуральной жидкости измеряли содержание вирусных РНК (детектируемых при КПЦР) и ТСID50. Клетки А549 инфицировали гибридными вирусами с МЗ 0,0001. Отношение «вирусная РНК/ТСID50» в пробах культуральной жидкости измеряли через 24, 48, 56 и 72 часа после заражения. Результаты представлены в виде средних значений, полученных в двух независимых экспериментах, и стандартных отклонений (планки погрешностей).

Рисунок 5. Кинетика роста и инфекционность гибридных ВКЭ