Вакцина против вируса клещевого энцефалита на основе европейского прототипного штамма

03.11.2011

За последние 30 лет заболеваемость КЭ в Европе увеличилась на 400% [5], и к настоящему времени описаны случаи КЭ в таких регионах, как южная часть Норвегии, где эта инфекция ранее не регистрировалась [24]. Кроме того, обнаружение в Финляндии клещей вида Ixodes persuicatus, которые служат переносчиками дальневосточных и сибирских штаммов ВКЭ, предполагает дальнейшее расширение ареала распространения этого вида клещей [5, 7, 8]. Несмотря на то что популя-ционные испытания вакцин против КЭ на основе штаммов европейского подтипа показали высокую степень защиты (примерно 99% в случае эндемичных штаммов ВКЭ) [25], необходимо дополнительно подтверждать защитные свойства имеющихся вакцин в отношении штаммов ВКЭ, находящихся в более отдаленном родстве. При том, что в отношении флавивирусов существует множество доказательств того, что вируснейтрализующие антитела, образующиеся в ответ на введенную вакцину, обеспечивают защиту от вызываемых ими заболеваний [26 - 32], демонстрируя надежную перекрестную защиту.

В более ранних исследованиях перекрестную нейтрализующую реактивность антител против разных подтипов ВКЭ в образцах сыворотки крови людей, вакцинированных против КЭ, анализировали с использованием изолятов вируса, относящихся к разным подтипам [9 - 12]. Было установлено, что образцы сыворотки содержат антитела, способные нейтрализовать эти изоляты, что указывает на способность вакцины на основе европейского штамма ВКЭ обеспечивать защиту и от дальневосточного и сибирского подтипов ВКЭ. Однако при оценке перекрестной реактивности антител после вакцинации результаты сильно расходились. Эти расхождения объясняли прежде всего достоверными различиями в репликационной способности изолятов вируса, отобранных для анализов [12], а также относили на счет методологических различий или чувствительности тестов, использовавшихся для анализов [9]. Понимание этих технических сложностей имеет решающее значение, так как сохранение антител и, следовательно, защиты от ВКЭ спустя несколько лет после вакцинации напрямую связано с количеством нейтрализующих антител, образовавшихся в результате вакцинации. Поэтому была необходимость в разработке тест-системы, позволяющей проводить объективный прямой сравнительный анализ нейтрализующих антител с перекрестной реактивностью против разных подтипов ВКЭ у человека. С помощью гибридных вирусов, имеющих каркас ВЛЗН и кодирующих отдельные белки ргМЕ ВКЭ, мы минимизировали ошибки, вызванные различиями в репликационной и инфекционной активности разных вирусов, так как инфек-ционность для всех созданных гибридных вирусов в использованной клеточной линии была одинаковой. В то же время такая стратегия позволила сохранить антигенные характеристики отдельных изолятов «дикого» типа ВКЭ, о чем свидетельствуют результаты исследования свойств гибридного ВКЭ-Мс1/ВЛЗН. Возможность использования такого подхода была продемонстрирована и другими исследователями при создании гибридных вакцин [33 - 35] или суррогатных вирусов для серологических исследований [36 - 38].

Титры нейтрализующих антител с перекрестной реактивностью в образцах сыворотки крови вакцинированных людей

Примечание: образцы сыворотки, взятые у 41 добровольца, вакцинированного против ВКЭ, исследованы с применением микрометода оценки реакции нейтрализации с использованием всех гибридных вирусов. Показаны индивидуальные титры и средние титры (горизонтальные линии) нейтрализующих антител со стандартной ошибкой среднего (СОС, планки погрешностей). Для оценки достоверности различий с гибридным штаммом Neudoerfl (BK3-Nd/ВЛЗН) применили односторонний дисперсионный анализ и критерий Тьюки. Нд - недостоверно; *Р< 0,05.

Рисунок 6. Титры нейтрализующих антител с перекрестной реактивностью в образцах сыворотки крови вакцинированных людей