Выявление антител к мутантным формам HBsAg

03.11.2011

ВГВ является чрезвычайно вариабельным, что выражается в существовании его различных генотипов и серотипов [19]. В России наиболее широко распространены генотип D и серотип ау (до 95% на отдельных территориях) [16]. Ранее нами был установлен факт циркуляции на территории Московского региона мутантных штаммов ВГВ, экспрессирующих HBsAg разных серотипов (ау и ad) с заменами G145R и S143L [3].

Мутант ВГВ G145R, открытый в 1991 году W.F. Carman с соавт., характеризуется выраженной серологической модификацией детерминанты малого поверхностного S-белка [6]. Эта детерминанта представляет собой совокупность кон- формационных эпитопов, образованных гидрофильной двухпетельной структурой, сформированной и поддерживаемой дисульфидными связями между парами цистеинов, находящимися в 124-й и 137-й, а также в 139-й и 147-й позициях S-белка. Мутант G145R, затрагивающий позицию 145 во второй петле S-белка, - наиболее типичный и стабильный мутант ВГВ диагностического и вакцинального «ускользания» [6, 16, 19]. Другая широко распространенная серологически значимая мутация - S143L - также затрагивает вторую петлю S-белка, но глубина серологических изменений, вызываемых ею, относительно незначительна [6, 13, 14].

Данные, представленные в литературе, указывают на возрастающее накопление HBsAg-мутантов у вакцинированных детей [7, 11]. Эта информация вызвала серьезную обеспокоенность относительно политики вакцинации против ГВ, которая проводится в настоящее время. Подразделение ВОЗ, занимающееся вакцинопрофилактикой вирусных гепатитов, решило пересмотреть свои стратегические планы с учетом возрастающей проблемы распространенности мутантов, «ускользающих» от вакцинации, а также рекомендовать создание независимой глобальной сети для мониторинга таких мутантных форм [9, 22].

В современных вакцинах против ГВ используется рекомбинантный HBsAg разных серологических субтипов (ad или ау). Кроме того, в некоторых вакцинах кроме рекомбинантного HBsAg присутствуют антигены к другим патогенам (поливалентные вакцины). Ранее считалось, что применение любых из вышеперечисленных видов вакцин обеспечивает универсальную защиту от ВГВ различных серотипов [20]. Однако в последнее время появляются данные, ставящие под сомнение эту точку зрения [4, 21]. Так, использование вакцин без учета се-ротипа ВГВ, распространенного на данной территории, может привести к недостаточной эффективности иммунизации - снижению порога инфицирования и увеличению случаев заражения ВГВ среди вакцинированного населения. Вместе с тем нам не удалось обнаружить в литературе данных о влиянии серотипа рекомбинантного HBsAg и моно/по-ливалентности вакцины на способность индуцировать антитела к мутантам ВГВ G145R и S143L.

Цель работы - оценить способность различных типов вакцин против ГВ индуцировать выработку антител, способных реагировать с мутантны-ми HBsAg G145R и S143L.

Материалы и методы

Способность aнти-HBsAg-aнтитeл взаимодействовать с разными вариантами HBsAg оценивали при помощи оригинальной методики - модификации теста нейтрализации, в ходе которого происходит конкуренция различных мутантных вариантов HBsAg за связывание со специфическими антителами [1]. Постановку теста проводили с исполь- зованием коммерческого набора реагентов, в состав которого входят 96-луночный планшет с им-мобилизированным и рекомбинантным HBsAg субтипов ау и ad, а также конъюгат - нативный HBsAg «дикого» типа, связанный с пероксидазой хрена. В ходе постановки теста каждый образец сыворотки, содержащий анти-HBsAg, тестировали в нескольких лунках, в одну из которых добавляли только анализируемый образец, в другие - образец и различные варианты HBsAg. При наличии в сыворотке антител, способных связываться с вариантом HBsAg, антитела блокировались HBsAg и удалялись из лунок на стадии промывки. Это, в свою очередь, приводило к уменьшению количества конъ-югата на твердой фазе и, как следствие, к снижению значений оптической плотности (СП) в лунках с HBsAg. По результатам тестирования рассчитывали индекс блокировки (ИБ). Величина ИБ прямо пропорциональна способности поствакцинальных антител связываться с той или иной разновидностью HBsAg. Для проведения сравнительного анализа и повышения чувствительности методики сыворотки, содержащие анти-HBsAg, анализировали в оптимальных разведениях. Оптимальным считали разведение, при котором значение СП сыворотки в использованной тест-системе для выявления анти-HBsAg находилось в зоне прямолинейной зависимости СП образца от концентрации анти-HBsAg (СП от 0,5 до 2,5).