Доклиническая аттестация специфической активности и подлинности отечественной вакцины

03.02.2012

Протокол иммунизации включал двукратное (О и 28 сут) введение животным вакцины КомбиВИЧвак. В опытной группе вводили одну дозу препарата (50 мкг рекомбинантного белка TBI и 75 мкг плазмиды pcDNA3.1), в контрольной - физиологический раствор.

Постановку ИФА и иммуноблоттинга проводили согласно инструкциям производителей, заменив в тест-системах конъюгат против IgG человека на конъюгат против IgG мыши.

Результаты и обсуждение

В наших исследованиях (2004 - 2006 гг.) была показана эффективность иммунизации мышей ре-комбинантными антигенами, входящими в состав вакцины-кандидата ВИЧРЕПОЛ. Использование для этой цели мышей линейных или гибридов F1 позволяет получать стандартные и воспроизводимые результаты [5, 7].

Изучение однократной иммунизации мышей линии BALB/c экспериментальной вакциной ВИЧРЕПОЛ при различных способах введения антигена продемонстрировало ее недостаточную антигенную активность. Один из путей повышения активности антигена - изменение схемы иммунизации путем увеличения кратности введения вакцины. При двукратной прививке мышей в доклиническом изучении специфической активности вакцины КомбиВИЧвак использовали три способа введения вакцинного антигена: подкожный, внутримышечный и внугрибрюшинный (интервал между двумя иммунизациями - 28 сут, забор крови - через 7 сут после второй прививки). Для определения активности в ИФА мышиных иммунных сывороток использовали в качестве иммуносорбента антиген. входящий в состав вакцины КомбиВИЧвак, и конъ-югат кроличьих антител против иммуноглобулинов мыши с пероксидазой хрена. Результаты исследования трех серий вакцины-кандидата представлены в таблице 1.

Показано, что при всех трех способах (лучше при внутримышечном и внутрибрюшинном) введения вакцинного антигена мышам BALB/c в сыворотках привитых мышей регистрировались титры специфических антител от 1:2560 до 1:10 240, что значительно превышало титры антител к ВИЧ-1 при однократной иммунизации.

Полученные данные свидетельствуют, что выбранная схема иммунизации - две инъекции с интервалом 28 суток - позволяет получать достоверные и информативные результаты при лабораторном контроле вакцины-кандидата против ВИЧ-инфекции.

Для упрощения методики определения в ИФА титра антител к ВИЧ-1 в сыворотках иммунизированных вакциной мышей использовались коммерческие наборы реагентов с различными характеристиками антигенов ВИЧ, сорбированных в лунках планшета-иммуносорбента. Конъюгат против IgG человека с пероксидазой хрена, входящий в состав набора реагентов, заменяли на соответствующий конъюгат против IgG мыши. Результаты представлены в таблице 2.

Наиболее высокие и стабильные титры антител (1:1280) наблюдали при исследовании иммунных сывороток мышей в коммерческом наборе реагентов для ИФА «ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ», титры антител к ВИЧ-1 при анализе в других наборах реагентов для ИФА были значительно ниже. Это, по-видимому, связано с различной степенью сходства рекомбинантных антигенов вакцины и имму- носорбента из набора реагентов для ИФА. Состав рекомбинантных антигенов (белков ВИЧ-1, 2) в наборе реагентов «ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» представлен более широким набором антигенных рекомбинантных белков ВИЧ-1: р15, р17, р24, gp41, gpl20, gpl60. При использовании наборов реагентов, основанных на синтетических пептидных эпи-топах ВИЧ-1 («Пептоскрин-2», «ВИЧ-1, ВИЧ-2-ИФА-Авиценна»), реактивность антител к ВИЧ не была выявлена, по-видимому в связи с различием набора эпитопов в белках, используемых в пептидных тест-системах и в вакцине КомбиВИЧвак.