Выявление маркеров аттенуации

03.02.2012

Г.В. Дмитриев (grigorij.d@mail.ru), Ю.И. Забияка, Е.Б. Файзулоев (faizuloev@maii.ru), Т.К. Борисова, Р.Г. Десятскова, В.В. Зверев

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва (instmech@iitp.ru) лекции клеточных культур (Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург).

Резюме

Для иммунизации населения против вируса краснухи используют живую аттенуированную вакцину. Механизмы аттенуации вируса краснухи до сих пор полностью не изучены, поэтому остается актуальным выявление фенотипиче-ских и генетических маркеров аттенуации вируса краснухи. В данном исследовании был проведен анализ температурной чувствительности дикого и аттенуированного вариантов отечественного штамма вируса краснухи С-77 и были выявлены фенотипические маркеры аттенуации. Так, на основании анализа интенсивности репродукции дикого и ослабленного вариантов штамма С-77 при различных температурных режимах была установлена достоверная разница в титре холодоадаптированного варианта при температуре культивирования 33 и 39 °С, при отсутствии достоверной разницы для дикого варианта.

Ключевые слова: вирус краснухи, маркер аттенуации, температурная чувствительность, генотипирование

Введение

Вакцинация - наиболее экономичное и доступное средство борьбы с краснухой. В настоящее время в Российской Федерации для иммунизации населения против краснухи используются вакцины зарубежного производства. Однако для проведения широкомасштабной иммунизации требуется создание вакцины, основанной на отечественном вакцинном штамме. В процессе создания вакцинных препаратов необходимо решить ряд важнейших задач: выбор клеточного субстрата для аттенуации вируса и получения высокоактивного препарата, контроль специфической активности, безопасности препарата на всех стадиях производства.

Механизмы аттенуации вируса краснухи изучены не полностью, поэтому актуальными являются изучение механизмов ослабления диких вариантов вируса, поиск ключевых мутаций, ведущих к аттенуации, а также выявление характерных фе-нотипических проявлений, которые могут служить маркерами аттенуации и использоваться наряду с секвенированием для контроля генетической стабильности вакцинных штаммов.

Цель данной работы - выявление фенотипи-ческих маркеров аттенуации холодоадаптированного варианта штамма С-77 вируса краснухи.

Материалы и методы

В работе был использован отечественный штамм вируса краснухи С-77, выделенный РГ. Де-сятсковой в 2001 году из носового смыва больного манифестной формой краснухи. Для получения ослабленного варианта штамма С-77 дикий вариант длительно культивировался в культуре клеток Vero (Европейская коллекция клеточных культур, Великобритания): 34 пассажа при температуре 35 °С и четыре пассажа при 33 °С. Показано, что по своим биологическим характеристикам аттенуирован-ный вариант штамма С-77 аналогичен вакцинному штамму Wistar RA 27/3. По иммунологическому маркерному тесту на кроликах аттенуированный вариант штамма С-77, так же как и вакцинный штамм Wistar RA 27/3, обладал пониженной антигенной активностью в сравнении с диким вариантом штамма С-77 [3].

Культура клеток почки африканской зеленой мартышки (Vero) была получена из Российской коллекции клеточных культур (Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург).