Выявление маркеров аттенуации

03.02.2012

При культивировании са-варианта штамма С-77 наблюдался рост титра вируса как при 33 °С, так и при 39 °С. Наибольших значений титр достигал при температуре культивирования 33 °С, тогда как при 39 °С наблюдалось более медленное накопление вируса. У wt-варианта рост титра вируса при всех температурах был менее выражен, чем у са-варианта, что может быть обусловлено лучшей адаптацией ослабленного вируса к культуре клеток Vero, также не отмечалось выраженного различия в титре при температурах культивирования 33 и 39 °С.

Установлено, что на пятый день культивирования зараженных клеток наблюдался значительный рост титра аттенуированного варианта штамма С-77 при температуре 33 °С, величина титра составила 5,5 lgTЦД50/мл, и в то же время при 39 °С нарастание титра было менее выражено (4 lgTЦД50/мл) (рис. 1).

На пятый день культивирования дикого варианта штамма С-77 титр при 33 и 39 °С составил 2,9 и 3,1 lgTЦД50/мл соответственно (рис. 2).

Титр са-варианта штамма С-77 на пятый день культивирования был в 30 раз, а на шестой день - в 25 раз ниже при 39 °С, чем при температуре 33 °С (Р < 0,05), в то время как у дикого варианта не наблюдалось достоверной разницы в титрах вируса при температуре культивирования 33 и 39 °С.

В настоящий момент в мире успешно применяется живая аттенуированная вакцина против краснухи. До сих пор точно не установлены механизмы аттенуации вируса и не выработаны четкие критерии контроля генетической стабильности вакцинных штаммов, а в случае с вакцинным штаммом RA27/3 это не представляется возможным.

В нескольких исследованиях было показано, что морфология бляшек, особенности роста на разных культурах клеток, иммуногенетический маркер напрямую связаны с аттенуацией вируса краснухи [4]. В то же время было показано, что все вакцинные штаммы вируса краснухи обладают ts-фенотипом - это выражается в сниженной репродукции при температуре 39 °С по сравнению с 35 °С [5] и является важным маркером аттенуации.

В настоящей работе был использован отечественный штамм вируса краснухи С-77. На основе анализа нуклеотидной последовательности гена Е1 было установлено, что данный штамм относится к генотипу 1h. Референс-штаммы данной группы были выделены на территории Томска и Республики Беларусь. В базе данных GenBank (NCBI) зарегистрировано 16 вирусов, выделенных в недавнее время на территории СНГ и относящихся к этому генотипу.

Накопление аттенуированного варианта штамма С-77 вируса краснухи в культуральной жидкости при температуре культивирования 33 и 39 °С

Рисунок 1. Накопление аттенуированного варианта штамма С-77 вируса краснухи в культуральной жидкости при температуре культивирования 33 и 39 °С