Апробация в доклинических испытаниях метода определения вируснейтрализующей активности вакцины-кандидата

04.04.2012

Метод нейтрализации с использованием псевдовирусов и генно-инженерных линий клеток является новым технологическим подходом. Псев- довирусы представляют собой вирусные частицы, полученные из молекулярно клонированных оболо-чечных белков ВИЧ-1 определенного штамма и дефектного генома, который не способен обеспечить формирование инфекционных дочерних вирионов. Клетки-мишени, созданные методами генной инженерии, содержат рецептор CD4 и корецепторы CCR5 и CXCR4, а также репортерный ген люцифе-разы, который активируется в результате инфицирования ВИЧ-1. Экспрессия активированного гена люциферазы в инфицированных клетках детектируется с помощью люминометра, при этом интенсивность люминесценции пропорциональна уровню инфекции, а подавление люминесценции соответствует нейтрализации ВИЧ-инфекции [7]. В таблице 1 приведены сравнительные характеристики метода измерения степени ВИЧ-нейтрализации с помощью неклонированных изолятов на моно-нуклеарных клетках периферической крови (первый метод), вирусов ВИЧ-1, многократно пассированных на перевиваемых линиях Т-лимфоцитов (второй метод), и технологии использования псевдовирусов (третий метод).

Цель работы - апробация в доклинических испытаниях метода определения вируснейтрализую-щей активности вакцины-кандидата против ВИЧ-1 КомбиВИЧвак с помощью технологии использования псевдовирусов ВИЧ-1.

Материалы и методы

Определяли вируснейтрализующие антитела к ВИЧ-1 в иммунных сыворотках после иммунизации вакциной КомбиВИЧвак с помощью технологии применения псевдовирусов в культуре клеток TZM-bl.

Сравниваемый показатель Первичные лимфоциты периферической крови Перевиваемые линии Т-лимфоцитов Культура клеток TZM-bl
Тип клеток Первичные лимфоциты периферической крови Неопластические CD4+ Т-клетки Эпителиальные клетки HeLa
Вирус Первичный неклонированный Адаптированный к Т-клеткам вариант Псевдовирус первичный неклонированный
Продолжительность измерения 4 - 6 дней 5 - 7 дней 2 - 3 дня
Регистрация результата Антиген р24 Обратная транскриптаза Синцитий БОЕ ЦПД Антиген р24 Активность люциферазы, грин-флюоресцеин-белка, щелочной фосфатазы, бета-галактозидазы
Количество инфекционных циклов Множество Множество Только один
Способность измерять ингибирование прикрепления/ проникновения межклеточной инфекции Да/да Да/да Да/нет
Используемые корецепторы CCR5, CXCR4 и др. (CCR5 наиболее физиологичен) CXCR4 CCR5, CXCR4 (100-кратное превышение поверхностной концентрации CCR5 над первичными лимфоцитами)

Таблица 1. Сравнительные характеристики трех методов измерения степени нейтрализации ВИЧ-1

Это исследование состоит из пяти этапов, включающих подготовку материалов и проведение опыта. Исследование проводилось на базе ФБУН «ГНЦ ВБ «Вектор» сотрудниками Центра и представителями ГИСК им. Л.А. Тарасевича (ныне - ЦЭК МИБП ФГБУ «НЦ ЭСМП»).