Апробация в доклинических испытаниях метода определения вируснейтрализующей активности вакцины-кандидата

04.04.2012

Результаты и обсуждение

Результаты исследования вируснейтрализую-щей активности сывороток крови мышей, иммунизированных вакциной КомбиВИЧвак, для псевдовирусов SF162 и PVO4 приведены в таблице 3 с расчетом нейтрализующей IC50 как величины total IgG (мкг/мл) с указанием доверительного интервала на уровне значимости 5%.

Исследовали сыворотки, полученные до вакцинации и после двукратной вакцинации с интервалом 14 суток. Забор крови проводили на 14-е сутки после завершения прививок. Как видно из таблицы 3, титры образцов сывороток на 14-е сутки после иммунизации варьировали от IC50 = 1:1315 до IC50= 1:5000 для клона SF162 и от 1:36 до 1:53 для клона PVO4, что подтверждает крайне высокую чувствительность к нейтрализации клона SF162. При этом результаты исследования отрицательных сывороток, взятых до вакцинации, показывают IC50 > 1:20, что значимо отличается от результатов, полученных для иммунизированных мышей. Референс-сыворотка с высокой вируснейтрализующей активностью характеризовалась в проведенном опыте высоким уровнем титра антител (IC50 < 1:45 000 для клона SF162 и 1:5000 для клона PVO4). Пересчет значений IC50 как концентрации общего IgG иммунной сыворотки, соответствующей 50%-ной нейтрализации, на основании измерения уровня общего иммуноглобулина в сыворотке крови каждой мыши позволяет провести сравнение полученных значений нейтрализующей активности иммунных сывороток с активностью признанных мировых стандартов ВИЧ-нейтрализации - таких, как моноклональные антитела IgG 1b12, 2G12 и 2F5.

IC50 как разведение иммунной сыворотки крови мыши, мкг/мл IC50 как концентрация общего IgG в иммунной сыворотке крови мыши, мкг/мл
Псевдовирус Env-клон SF162 Env-клон PVO4 Env-клон SF162 Env-клон PVO4
Образцы сывороток крови мыши разведение сыворотки 95%-ный доверительный интервал разведение сыворотки 95%-ный доверительный интервал общий IgG 95%-ный доверительный интервал общий IgG 95%-ный доверительный интервал
1 - 14 0,00051 0,0009 -0,0003 0,019 0,013 - 0,028 1,58 0,93 - 2,79 58,9 40 - 87
1 - 0 < 0,05 - < 0,05 - > 155 - > 155 -
2 - 14 0,00076 0,00045 -0,00135 0,028 0,019 - 0,042 4,6 2,7 - 8,1 169,5 117 - 252
2 - 0 < 0,05 - < 0,05 - > 302 - > 302 -
3 - 14 0,0002 0,00012 -0,00036 0,023 0,016 - 0,034 0,49 0,29 - 0,86 55,2 37 - 81
3 - 0 < 0,05 - < 0,05 - > 120 - > 120 -
К+ > 0,00002 - 0,0002 - < 0,05 - 6,0 -
TriMab* - - - - 0,03** - 4,2** -

Примечание:*ТriМаb представляет собой смесь трех широко нейтрализующих моноклональных антител IgG 1b12, 2G12 и 2F5. **Данные взяты из статьи Li М. и соавт. [5].

Таблица 3. Нейтрализация псевдовирусных клонов ВИЧ-1 субтипа В сыворотками крови иммунных мышей, двукратно вакцинированных КомбиВИЧвак, и контрольной нейтрализующей сывороткой крови (К+) ВИЧ-инфицированного пациента