Сравнительная оценка активности анти-HBs

04.04.2012

Ранее нами был установлен факт циркуляции на территории Московского региона мутантных штаммов ВГВ с серологически значимыми заменами в HBsAg - G145R, S143L [1]. Это еще больше повышает актуальность разработки новых методических подходов к оценке протективного потенциала вакцин в отношении мутантных форм ВГВ, а также к проведению сравнительных исследований, направленных на изучение эффективности антительного ответа, возникающего вследствие активной иммунопрофилактики или перенесенного гепатита В.

Цель работы - оценка активности анти-HBs, индуцированных вакцинацией или естественным течением гепатита В, в отношении мутантных вариантов HBsAg с важными в серологическом отношении заменами в 145-м и 143-м положениях.

Материалы и методы

В работе использованы сыворотки 36 лиц, вакцинированных или переболевших ГВ, с уровнем анти-HBs не менее 100 Ед./мл, из них 13 человек привиты рекомбинантной моновакциной Энджерикс, 3 - рекомбинантной моновакциной «Комбиотех« серотипа ау, 8 - рекомбинантной по-лиовакциной Твинрикс и 12 человек переболели гепатитом В.

Способность анти-HBs взаимодействовать с различными вариантами HBsAg оценивали при помощи модификации теста нейтрализации, как было описано ранее [1]. В ходе проведения этого теста исследуемые анти-HBs одновременно взаимодействуют с тем или иным вариантом HBsAg и меченым HBsAg «дикого» типа. В результате, если анти-HBs способны взаимодействовать с данным вариантом HBsAg, происходит конкурентное снижение (нейтрализация) активности анти-HBs к меченому HBsAg «дикого» типа, что отражается на величине детектируемого специфического сигнала на заключительном этапе постановки ИФА.

В качестве источника различных вариантов HBsAg для нейтрализации анти-HBs использовали HBsAg субтипов ay, ad (Chemicon, Англия), рекомбинантные пептиды «дикого« типа - HBsAg adw1 (wt) и с заменами adw1 T143K, adw1 G145R (ООО «НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород), а также сыворотки крови хронических носителей:

  • мутантных штаммов ВГВ c заменой S143L (сыворотки № 283, 2323);
  • мутантных штаммов ВГВ с заменой G145R (сыворотки № 111, 2043, 1537);
  • ВГВ «дикого» типа (сыворотки № 2505, 2511, 6492).

По результатам постановки теста нейтрализации рассчитывали относительную активность анти-HBs, величина которой прямо пропорциональна способности исследуемых антител связываться с той или иной разновидностью HBsAg.

Статистическую обработку полученных данных проводили при помощи программы GraphPad Prism.