Основные этапы и перспективы создания вакцин против вирусного гепатита С

02.12.2012
Схематическое изображение РНК ВГС и полипептидов после протеолитического расщепления полипротеина

Примечание: НТО - нетранслируемые области.

Рисунок 2. Схематическое изображение РНК ВГС и полипептидов после протеолитического расщепления полипротеина

Схема жизненного цикла вируса

Примечание: ГАГ - глюкозамингликаны, SR-B1 - сапрофитный рецептор В1.

Рисунок 3. Схема жизненного цикла вируса

Первый этап в создании вакцины пришелся на середину 1990-х годов прошлого века, когда были получены рекомбинантные оболочечные белки вируса [12]. При экспериментальной иммунизации этими белками шимпанзе и последующем заражении животных изолятом вируса, из мажорного варианта которого были получены рекомбинантные гликопротеины Е1 и Е2, было выявлено много важных закономерностей. Так, было показано, что экспрессия векторов, содержащих нуклеотидную последовательность белков Е1 и Е2, должна происходить в клетках, где есть ферментные системы для гликозилирования протеинов, то есть протектив-ная способность антител к оболочечным белкам ВГС зависит от того, были ли они гликозилированы или нет. Рекомбинантные гликопротеины вируса обладают высокой иммуногенностью, антитела к ним у иммунизированных шимпанзе выявлялись при разведении сыворотки до 1:819 200 [12]. Но протективная способность этих антител была невысока: лишь часть животных удавалось защитить от заражения тем же самым изолятом вируса субтипа 1а, причем инфекционная доза была умеренной - не превышала 10 CID50 (CID50 - это инфекционная доза вируса, при которой у 50% обезьян, участвующих в эксперименте, развивается гепатит). При введении животным более высокой инфекционной дозы вируса или использовании другого изолята у всех шимпанзе в крови появлялась РНК ВГС [12]. Эти результаты с учетом большой генетической гетерогенности ВГС показали, какую непростую проблему предстоит решить при создании вакцины на основе В-клеточных эпитопов обо-лочечных белков. В последующее десятилетие в различных исследовательских центрах проводился анализ оболочечных белков ВГС с целью выявления В-клеточных эпитопов из консервативных по структуре или функционально важных зон белков. Особое внимание уделялось В-эпитопам, на которые образуются вируснейтрализующие (ВН) антитела с широкой направленностью против разных генотипов и субтипов ВГС.

Оболочечные белки вируса должны иметь функционально важные зоны, поскольку они вовлечены в связывание с рецептором и корецепторами и в процесс слияния оболочки вируса и мембраны эндосомы клетки. Вернемся к этой проблеме позже, а пока отметим, что наступил период (во второй половине 1990-х и начале 2000-х гг.), когда инициатива в разработке вакцин перешла к конструкциям на основе Т-клеточных эпитопов.

Второй этап разработки вакцины

Анализ редких случаев самопроизвольной элиминации ВГС при острой естественной (у людей) и экспериментальной (у шимпанзе) инфекции показал, что ведущую роль в ограничении и элиминации вируса выполняют Т-лимфоциты CD4+ (хелперы) и CD8+ (киллеры) [19, 24]. Иммунодоминантные Т-клеточные эпитопы, ответ на которые был обнаружен у лиц с самопроизвольной элиминацией вируса, в основном были направлены на белки NS3 и core. Начались эксперименты по созданию вакцины на основе эпитопов для цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ). Планировалось использовать ее в терапевтических целях. В начале 2000-х годов фирма Chiron приготовила первые опытные образцы такой вакцины для клинических испытаний, которые завершились неудачно. У части пациентов после применения вакцины ухудшились биохимические печеночные показатели и повысился индекс гистологической активности (ИГА) в биоптатах печени. Все это было вызвано усилением активности Т-киллерных лимфоцитов. Такая конструкция в качестве терапевтической вакцины оказалась неудачной. Необходимо было искать другие подходы.