Сравнительное изучение специфической активности вакцин для профилактики гепатита В

02.12.2012

Введение

В Российской Федерации зарегистрирован ряд отечественных и зарубежных вакцин, предназначенных для профилактики гепатита В. Все они производятся с использованием ДНК-рекомбинантной технологии путем культивирования модифицированных дрожжевых клеток, продуцирующих рекомбинантный (генно-инженерный) поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg). Готовые вакцины должны как отвечать общим требованиям по показателям качества медицинских иммунобиологических препаратов, например по безопасности, так и обладать определенными характеристиками, свойственными именно данному продукту, - специфической активностью, эпидемиологической эффективностью и др. [9 - 12].

С учетом более чем 20-летнего опыта применения ДНК-рекомбинантных дрожжевых вакцин против гепатита В рядом организаций (ВОЗ, Европейским агентством по лекарственным средствам (EMA), а также Агентством по продовольствию и медикаментам США (FDA)) был предложен способ количественного определения специфической активности (СА) вакцин методом иммуноферментного анализа (ИФА) в качестве альтернативы обязательным испытаниям СА in vivo на биологических моделях - мышах и морских свинках. Определение содержания HBsAg в вакцинах при испытании в ИФА возможно лишь с применением аттестованных (валидированных) для этой задачи иммунофер-ментных тест-систем (ИФТС) [8].

Ранее нами на основании представленных экспериментальных данных была показана возможность применения отечественной ИФТС «Гепа-Стрип» (ООО «Ниармедик Плюс», Москва) для определения СА вакцин против гепатита В, так как она демонстрировала удовлетворительные аналитические показатели [4].

Цель данной работы - сравнительное изучение СА вакцин против гепатита В в отечественной ИФТС «ГепаСтрип» и референсной тест-системе Abbott Auszyme Monoclonal, широко применявшейся ранее для этих целей.

Материалы и методы

В сравнительных опытах было изучено пять из шести зарегистрированных на территории России вакцин для профилактики гепатита В (две - отечественного и три - зарубежного производства). Номинальное (расчетное) содержание рекомбинантного HBsAg (субтипов «ad» и «ay») во всех препаратах составляло 20 мкг/мл. Все вышеперечисленные препараты содержали вспомогательные компоненты: адъювант (гидроксид алюминия) и консервант (тиомерсал). Разведения образцов вакцин готовили в двух независимых повторах от 1:1000 до 1:64 000. В качестве разбавителя для приготовления разведений применяли фосфатно-солевой буферный раствор (pH = 7,4) с добавлением 0,2%-ного бычьего сывороточного альбумина (БСА), приготовленный по следующей прописи: на 1 литр дистиллированной воды - 8 г NaCl, 0,2 г KCl, 1,15 г Na2HPO4, 0,2 г KH2PO4 и 2 г БСА. Каждое последующее разведение готовили независимо от предыдущего в отдельных пробирках Eppendorf. Содержимое каждой пробирки перемешивали в миксере типа Vortex в течение 8 - 10 секунд. Исследуемые пробы вносили в лунки иммуносорбента в случайном порядке. Режим постановки реакции ИФА определяли в соответствии с инструкциями по применению тест-систем. Исследование выполнялось одновременно в обеих тест-системах одним оператором с использованием одного и того же проверенного оборудования.

Статистическую обработку результатов проводили с применением валидированной компьютерной программы «Паралайн», разработанной главным метрологом ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» В.Г. Петуховым, зарегистрированной в реестре программ для ЭВМ (номер свидетельства 2006612065 от 15 июня 2006 г.) и предназначенной для определения активности препаратов в ИФА. Результат оценивали по отношению к референс-препарату методом параллельных линий [7]. Для определения активности изучаемых вакцин по отношению к ре-ференс-препарату в программу вводили значения оптической плотности (ОП), полученные при постановке ИФА в двух повторах на каждое разведение вакцины.

Результаты определения СА, полученные в программе «Паралайн», валидировали по критериям линейности и параллельности, определяемым программой [7]. Для оценки совпадения результатов, полученных в изученных тест-системах, применяли коэффициент корреляции Пирсона (r) [5].

Все исследованные вакцины были пронумерованы от 1 до 5.