epidemiologyЭпидемиология и ВакцинопрофилактикаEpidemiology and Vaccinal Prevention2073-30462619-0494«Numicom» LLC10.31631/2073-3046-2022-21-4-103-112epidemiology-1617Research ArticleПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИPRACTICAL ASPECTS OF EPIDEMIOLOGY AND VACCINE PREVENTIONРазработка иммуноферментной системы для выявления специфических IgG к коронавирусу SARS-COV-2 методом иммунного блоттинга в формате «line blot»The Development of ELISA-test System for Detection of Specific IgG to SARS-COV-2 Coronavirus by Immunoblotting (Line Blot)https://orcid.org/0000-0002-4556-135XМарданлыС. Г.MardanlyS. G.

Сейфаддин Гашимович Марданлы – д. м. н., академик Российской академии медико-технических наук; профессор кафедры фармакологии и фармацевтических дисциплин ГГТУ; директор по науке

+7 (909) 992-14-94

г. Орехово­-Зуево

г. Электрогорск

Seyfaddin G. Mardanly – Dr. Sci. (Med.), Academician of the Russian Academy of Medical Technical Sciences; Professor at the Department of Pharmacology and Pharmaceutical Sciences; Science Director

+7 (909) 992-14-94

Orekhovo-Zuevo

Elektrogorsk, Moscow region

ekolab-president@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0426-3126ПоповаТ. В.PopovaT. V.

Татьяна Владимировна Попова – к. х. н., профессор, заведующий кафедрой фармакологии и фармацевтических дисциплин; фармацевтический факультет

142611, Московская область, Орехово-Зуево, улица Зелёная, 22

+7 (965) 328-23-58

г. Электрогорск

Tatyana V. Popova – Cand. Sci. (Chemical), Professor, Head of the Department of Pharmacology and Pharmaceutical Disciplines, Faculty of Pharmacy

22, Zelenaya Street, Orekhovo-Zuevo, Moscow Region, 142611

+7 (965) 328-23-58

Elektrogorsk, Moscow region

tvpopova45@yandex.ruФГАОУ ВО Государственный гуманитарно-­технологический университет; ЗАО «ЭКОлаб»РоссияState University of Humanities and Technology; Closed Joint Stock Company EKOlab (CJSC EKOlab)Russian FederationЗАО «ЭКОлаб»РоссияClosed Joint Stock Company EKOlab (CJSC EKOlab)Russian Federation202215092022214103112Copyright © Марданлы С.Г., Попова Т.В., 20222022Марданлы С.Г., Попова Т.В.Mardanly S.G., Popova T.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.epidemvac.ru/jour/article/view/1617

Актуальность. Проблема своевременной и эффективной диагностики COVID-19 остается одной из основных проблем, стоящих перед здравоохранением. В связи с этим задача разработки тест-систем для этиологической диагностики COVID-19 сохраняет свою исключительную актуальность. Цель. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления специфических иммуноглобулинов класса G к коронавирусу SARS-COV-2 методом иммунного блоттинга в формате «line blot». Методы. Отработка технологических приемов получения компонентов тест-системы и предварительная оценка ее диагностической эффективности при исследовании сывороток крови пациентов с COVID-19, проходивших лечение в Первой Градской больнице имени Н. И. Пирогова Москвы, и сывороток здоровых доноров. Результаты. Исследование 104 образцов сыворотки крови больных COVID-19 и 100 образцов сыворотки крови здоровых доноров, предварительно протестированных методом ИФАна наличие IgG к SARS-CoV-2 при помощи тест-систем «Vitrotest SARS-CoV-2 IgG» фирмы «Vitrotest» (Украина) и «ИФА-SARS-CoV-2-АТ-G» фирмы ЗАО «ЭКОлаб» (Россия), показало высокую диагностическую эффективность новой отечественной тест-системы. Заключение. Новая тест-система после прохождения процедуры государственной регистрации медицинского изделия может быть рекомендована в качестве подтверждающего теста при этиологической лабораторной диагностике COVID-19.

Relevance. The problem of timely and effective diagnosis of COVID-19 remains one of the main problems facing healthcare. In this regard, the task of developing test systems for the etiological diagnosis of COVID-19 remains extremely relevant. Purpose To develop ELISA test system for detection of G specific immunoglobulins to SARS-COV-2 coronavirus by immunoblotting (Line Blot). Methods. Elaboration of techniques for obtaining test components and preliminary assessment of its diagnostic effectivenessin blood serums from COVID-19 patients treated at N. I. Pirogov First Gradsky Hospital, Moscow, and serums from healthy human donors. Results. The study of 104 blood serum samples from COVID-19 patients and 100 blood serum samples from healthy human donors, pre-tested by ELISA IgG to SARS-CoV-2 using «Vitrotest SARS-CoV-2 IgG» test systems (Vitrotest, Ukraine) and «ELISA-SARS-CoV-2-AB-G» (CJSC EKOlab, Russia) showed high diagnostic efficiency of the new test system. Conclusion. The new test system after state registration of the medical device can be recommended as a confirmatory test for the etiological laboratory diagnosis of COVID-19.

COVID-19SARS-CoV-2лабораторная диагностикаразработкатест-системалайн-блотCOVID-19SARS-CoV-2laboratory diagnosticsdevelopmenttest systemLine-BlotReferencesВременные методические рекомендации МЗ РФ (Версия 11 от 07.05.2021). «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)». Доступно по: http:.xn--80aesfpebagmfblc0a.xn--p1ai/ai/doc/872/attach/Bmr_COVID-19_compressed.pdf. Ссылка активна на 24.02.20022.Vremennye metodicheskie rekomendacii MZ RF (Versija 11 ot 07.05.2021). «Profilaktika, diagnostika i lechenie novoj koronavirusnoj infekcii (COVID-19)». Available at: http:.xn--80aesfpebagmfblc0a.xn--p1ai/ai/doc/872/attach/Bmr_COVID-19_compressed.pdf. Accessed: 24.02.2022 (In Russ).Диагностическое тестирование для определения вируса SARS-CoV-2: Временные рекомендации, 11 сентября 2020 г. Доступно по: https:.www.euro.who.int/ru/health-topics/health-emergencies/coronavirus-covid-19/publications-and-technical-guidance/2020/diagnostic-testing-for-sars-cov-2-interim-guidance,-11-september-2020. Ссылка активна на 24.02.2022.Diagnosticheskoe testirovanie dlja opredelenija virusa SARS-CoV-2: Vremennye rekomendacii, 11 sentjabrja 2020 g. Available at: https:.www.euro.who.int/ru/health-topics/health-emergencies/coronavirus-covid-19/publications-and-technical-guidance/2020/diagnostic-testing-for-sars-cov-2-interim-guidance,-11-september-2020. Accessed: 24.02.2022. (In Russ).Ozcurumez M., Ambrosch A., Frey O., et al. SARS-CoV-2 antibody testing — questions to be asked . J. Allergy Clin. Immunol. 2020. Vol. 146, N1. P. 35–43. DOI: 10.1016/j.jaci.2020.05.020Ozcurumez M, Ambrosch A, Frey O, et al. SARS-CoV-2 antibody testing — questions to be asked. J Allergy Clin Immunol. 2020; 146(1):35–43. DOI: 10.1016/j.jaci.2020.05.020.Sethuraman N., Stanleyraj S., Ryo A. Interpreting Diagnostic Tests for SARS-CoV-2 . JAMA. 2020. Vol. 323, N22. P. 2249–2251. DOI: 10.1001/jama.2020.8259.Sethuraman N, Stanleyraj S, Ryo A. Interpreting Diagnostic Tests for SARS-CoV-2. JAMA. 2020; 323(22): 2249-51. DOI: 10.1001/jama.2020.8259.Watson J., Richter A., Deeks J. Testing for SARS-CoV-2 antibodies. BMJ. 2020. Vol. 370. P. m3325. DOI: 10.1136/bmj.m3325Watson J, Richter A, Deeks J. Testing for SARS-CoV-2 antibodies. BMJ. 2020;370:m3325. DOI: 10.1136/bmj.m3325.Du Z., Zhu F., Guo F., et al. Detection of antibodies against SARS-CoV-2in patients with COVID-19. J. Med. Virol. 2020. Vol. 92, N10. P. 1735–1738. DOI: 10.1002/jmv.25820Du Z, Zhu F, Guo F, et al. Detection of antibodies against SARS-CoV-2in patients with COVID-19. J Med Virol. 2020; 92(10):1735–8. DOI: 10.1002/jmv.25820.La Marca A., Capuzzo M., Paglia T., et al. Test-ing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays . Reprod. Biomed. Online. 2020. Vol. 41, N3. P. 483–499. DOI: 10.1016/j.rbmo.2020.06.001La Marca A, Capuzzo M, Paglia T, et al. Test-ing for SARS-CoV-2 (COVID-19): a systematic review and clinical guide to molecular and serological in-vitro diagnostic assays. Reprod Biomed Online. 2020;41(3):483–99. DOI: 10.1016/j.rbmo.2020.06.001.McAndrews K.M., Dowlatshahi D.P., Dai J., et al. Heterogeneous an-tibodies against SARS-CoV-2 spike receptor binding domain and nucleocapsid with implications for COVID-19 immunity . JCI Insight. 2020. Vol. 5, N18, e142386. P. 1–14. DOI: 10.1172/jci.insight.142386McAndrews KM, Dowlatshahi DP, Dai J, et al. Heterogeneous antibodies against SARS-CoV-2 spike receptor binding domain and nucleocapsid with implications for COVID-19 immunity. JCI Insight. 2020; 5(18): e142386, 1–14. DOI: 10.1172/jci.insight.142386.Sethuraman N., Stanleyraj S., Ryo A. Interpreting Diagnostic Tests for SARS-CoV-2 . JAMA. 2020. Vol. 323, N22. P. 2249–2251. DOI: 10.1001/jama.2020.8259Sethuraman N, Stanleyraj S, Ryo A. Interpreting Diagnostic Tests for SARS-CoV-2. JAMA. 2020; 323 (22): 2249–51. DOI: 10.1001/jama.2020.8259Haselmann V., Özçürümez M.K., Klawonn F., et al. Results of the first pilot external quality assessment (EQA) scheme for anti- SARS-CoV2-antibody testing . Clin. Chem. Lab. Med. 2020. Vol. 58, N12. P. 2121–2130. DOI: 10.1515/cclm-2020-1183Haselmann V, Özçürümez MK, Klawonn F, et al. Results of the first pilot external quality assessment (EQA) scheme for anti- SARS-CoV2-antibody testing. Clin Chem Lab Med. 2020; 58(12): 2121–30. DOI: 10.1515/cclm-2020-1183Марданлы С. Г., Авдонина А. С. Мамедова С. Г. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител класса IgG к возбудителю COVID-19 в сыворотке (плазме) крови человека . Клиническая лабораторная диагностика. 2020. Т. 65, №11. С. 683–687. DOI 10.17116/klinderma202019041465Mardanly SG, Avdonina AS, Mamedova SG. Development of an enzyme immunoassay system for the detection of IgG class antibodies to the COVID-19 pathogenin human serum (plasma). Klinicheskaja laboratornaja diagnostika. 2020; 65 (11): 683–7 (In Russ). DOI 10.17116/klinderma202019041465Марданлы С. Г. Разработка и испытания новых иммуноферментных тест систем для диагностики токсоплазмоза. Клиническая лабораторная диагностика. 2009. № 2. С: 35–37.Mardanly SG. Development and testing of new enzyme immunoassay systems for the diagnosis of toxoplasmosis. Klinicheskaja laboratornaja diagnostika 2009; 2: 35–7 (In Russ).Марданлы С. Г. Эпидемиологический надзор за инфекциями TORCH группы на основе современных технологий лабораторной диагностики. Дисс….. д-ра мед. наук. Москва; 2016. Доступно на: http:.www.dslib.net/epidemiologia/jepidemiologicheskij-nadzor-za-infekcijami-torch-gruppy-na-osnove-sovremennyh.html. Ссылка активна на 24 февраля 2022.Mardanly SG. Epidemiological surveillance of TORCH group infections based on modern laboratory diagnostic technologies. [dissertation]. Moscow; 2016. Available at: http:.www.dslib.net/epidemiologia/jepidemiologicheskij-nadzor-za-infekcijami-torch-gruppy-na-osnove-sovremennyh.html. Accessed: 24.02.2022 (In Russ).Марданлы С. Г., Симонов В. В., Авдонина А. С. Производство наборов реагентов для клинической лабораторной диагностики иммунохимическими методами. Орехово-Зуево: ГГТУ. 2017.Mardanly SG, Simonov VV, Avdonina AS. Production of reagent kits for clinical laboratory diagnostics by immunochemical methods. Orehovo-Zuevo: GGTU; 2017, 208 (In Russ).Марданлы С. Г., Симонова Е. Г., Симонов В. В. Инфекции TоRCH-группы: клиническая лабораторная диагностика, эпидемиологический надзор и контроль. Москва: Транзит-ИКС. 2018.Mardanly SG., Simonova EG., Simonov VV. Torch-group infections: clinical laboratory diagnostics, epidemiological surveillance and control. Moscow:Tranzit-IKS; 2018, 282 (In Russ).Марданлы С. Г., Симонова Е. Г., Симонов В. В. Герпесвирусные инфекции: этиология и патогенез, клиника и лабораторная диагностика, эпидемиология и профилактика. Орехово-Зуево: ГГТУ. 2020.Mardanly SG., Simonova EG., Simonov VV. Herpesvirus infections: etiology and pathogenesis, clinic and laboratory diagnostics, epidemiology and prevention. Orehovo-Zuevo: GGTU; 2020, 316 (In Russ).Hui Penga, Li-tao Yanga, Ling-yun Wangb, et al. Long-lived memory T lymphocyte responses against SARS coronavirus nucleocapsid proteinin SARS-recovered patients . Virology. 2006. Vol. 351, N2. P. 466–475. DOI: 10.1016/j.virol.2006.03.036.Hui Penga, Li-tao Yanga, Ling-yun Wangb, et al. Long-lived memory T lymphocyte responses against SARS coronavirus nucleocapsid proteinin SARS-recovered patients. Virology. 2006; 351: 466–75Hiscox J.A., Wurm T., Wilson L., et al. The coronavirus infectious bronchitis virus nucleoprotein localizes to the nucleolus . J. Virol. 2001. Vol. 75, N1. P. 506–512. DOI: 10.1128/JVI.75.1.506–512.2001.Hiscox JA, Wurm T, Wilson L, et al. The coronavirus infectious bronchitis virus nucleoprotein localizes to the nucleolus. J Virol. 2001; 201: 506–12. DOI: 10.1128/JVI.75.1.506–512.2001Narayanan K., Chen C.J., Maeda J., Makino S. Nucleocapsid independent specific viral RNA packaging via viral envelope protein and viral RNA sig-nal . J. Virol. 2003. Vol. 77, N5. 2922–2927. DOI: 10.1128/jvi.77.5.2922–2927.2003.Narayanan K, Chen CJ, Maeda J, Makino S. Nucleocapsid independent specific viral RNA packaging via viral envelope protein and viral RNA signal. J Virol. 2003; 77: 2922–27. DOI: 10.1128/jvi.77.5.2922–2927.2003Ning Wang, Jian Shang, Shibo Jiang, Lanying Du. Subunit vaccines against emerging pathogenic human coronaviruses . Front. Microbiol. 2020; Vol. 11, art. 298. Доступно на: https:.www.frontiersin. org/journals/microbiology#articles. DOI: 10.3389/fmicb.2020.00298. Ссылка активна на 24.02.2022.Ning Wang, Jian Shang, Shibo Jiang, Lanying Du. Subunit vaccines against emerging pathogenic human coronaviruses. Front Microbiol. 2020; 11: 298. DOI: 10.3389/fmicb.2020.00298Brouwer Ph.J.M., Caniels T.G., van der Straten K., et al. Potent neutralizing antibodies from COVID-19 patients define multiple targets of vulnerability . Science. 2020. Vol. N6504. P. 369: 643–650. DOI: 10.1126/science.abc5902.Brouwer PhJM, Caniels TG., van der Straten K, et al. Potent neutralizing antibodies from COVID-19 patients define multiple targets of vulnerability. Science. 2020; 369: 643–50. DOI: 10.1126/science.abc5902Rui Shi, Chao Shan, Xiaomin Duan, et al. A human neutralizing anti-body targets the receptor-binding site of SARS-CoV-2. Nature. 2020. Vol. 584, N7819. P. 120–124. DOI: 10.1038/s41586-020-2381-y.Rui Shi, Chao Shan, Xiaomin Duan , et al. A human neutralizing antibody targets the receptor-binding site of SARS-CoV-2. Nature. 2020; 584: 120–4. DOI: 10.1038/s41586-020-2381-yNarayanan K., Maeda A., Maeda J., Makino S. Characterization of the coronavirus M protein and nucleocapsid interactionin infected cells. J. Virol. 2000. Vol. 74, N17. P. 8127–8134. DOI: 10.1128/jvi.74.17.8127–8134.2000.Narayanan K, Maeda A, Maeda J, Makino S. Characterization of the coronavirus M protein and nucleocapsid interactionin infected cells. J Virol. 2000; 74(17): 8127–34. DOI: 10.1128/jvi.74.17.8127–8134.2000Opstelten D.J., Raamsman M.J., Wolfs K., et al. Envelope glycoprotein interactionsin coronavirus assembly. J. Cell. Biol. 1995. Vol. 131, N2. P. 339–349. DOI: 10.1083/jcb.131.2.339.Opstelten DJ, Raamsman MJ, Wolfs K, et al. Envelope glycoprotein interactionsin coronavirus assembly. J Cell Biol. 1995; 131(2): 339–49. DOI: 10.1083/jcb.131.2.339Jun Liu, Yeping Sun, Jianxun Qi, et al. The Membrane Protein of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Acts as a Dominant Immunogen Revealed by a Clustering Region of Novel Functionally and Structurally Defined Cyto-toxic T-Lymphocyte Epitopes . J. Infect. Dis. 2010. Vol. 202, N8. P. 1171–1180. DOI: 10.1086/656315.Jun Liu, Yeping Sun, Jianxun Qi, et al. The Membrane Protein of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Acts as a Dominant Immunogen Revealed by a Clustering Region of Novel Functionally and Structurally Defined Cytotoxic T-Lymphocyte Epitopes. J Infect Dis. 2010; 202(8): 1171–80. DOI: 10.1086/656315Schoeman D., Fielding B.C. Coronavirus envelope protein: current knowledge . Virol. J. 2019. Vol. 16, N1. P. 69. DOI: 10.1186/s12985-019-1182-0Schoeman D, Fielding BC. Coronavirus envelope protein: current knowledge. J Virol. 2019; 16 (1): 69. DOI: 10.1186/s12985-019-1182-0

The authors declare that there are no conflicts of interest present.