epidemiologyЭпидемиология и ВакцинопрофилактикаEpidemiology and Vaccinal Prevention2073-30462619-0494«Numicom» LLC10.31631/2073-3046-2022-21-5-107-119epidemiology-1680Research ArticleПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИPRACTICAL ASPECTS OF EPIDEMIOLOGY AND VACCINE PREVENTIONПрименение ионообменной хроматографии при разработке технологии получения инактивированной вакцины против полиомиелитаApplication of Ion Exchange Chromatography in the Development of Technology to Obtain Inactivated Poliovirus Vaccinehttps://orcid.org/0000-0001-5381-2393ПиняеваА. Н.PiniaevaA. N.

Анастасия Николаевна Пиняева – начальник управления разработки и внедрения инновационных и  полупромышленных технологий

Москва

Anastasia N. Piniaeva – Head of Division of Development and Integration of Innovative and Semi-industrial Technologies

Moscow, 108819

pinyaeva_an@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0003-3200-763XКовпакА. А.KovpakA. A.

Анастасия Александровна Ковпак  – руководитель группы процессов очистки и  формуляции готовых лекарственных форм

Москва

Anastasia A. Kovpak – Head of team of purification processes and finished dosage forms formulation

Moscow

kovpak_aa@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0003-0995-7944ИвинЮ. Ю.IvinY. Y.

Юрий Юрьевич Ивин  – заместитель начальника управления разработки и  внедрения инновационных и  полупромышленных технологий

Москва

Yury Yu. Ivin – Deputy Head of Division of Development and Integration of Innovative and Semi-industrial Technologies

Moscow

ivin_uu@chumakovs.suСанджиеваС. Х.SandzhievaS. H.

Саглара Хюрмяевна Санджиева – технолог группы процессов очистки и формуляции готовых лекарственных форм

Москва

Saglara H. Sandzhieva – Technologist of team of purification processes and finished dosage forms formulation

Moscow

sandjieva_sh@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0002-5907-0615ШишоваА. А.ShishovaA. A.

Анна Андреевна Шишова – руководитель группы разработки валидации методик, ФГАНУ «Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М. П. Чумакова» РАН

Москва

Аnna A. Shishova – Head of Analytical Method Development and Validation Team, Federal State Autonomous Institution of Science «Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-and-Biological Products» of Russian Academy of Sciences

Moscow

shishova_aa@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0002-7530-3925ЦелыхИ. О.TсelykhI. O.

Ирина Олеговна Целых  – микробиолог группы разработки и  валидации методик

Москва

Irina O. Tсelykh – Microbiologist of Analytical Method Development and Validation Team

Moscow

tselih_io@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0001-7980-0921ВасиленкоВ. Е.VasilenkoV. E.

Владислав Евгеньевич Василенко  – руководитель группы ферментации и  культивирования

Москва

Vladislav E. Vasilenko – Head of fermentation and cultivation team

Moscow

vasilenko_ve@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0002-8446-1853КааК. В.KaaK. V.

Константин Владимирович Каа  – технолог группы ферментации и  культивирования

Москва

Konstantin V. Kaa  – Technologist of fermentation and cultivation team

Moscow

kaa_kv@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0002-5259-0984МажедЖ. Х.MazhedZh. H.

Жад Хассан Мажед – технолог группы ферментации и культивирования

Москва

Zhad H. Mazhed – Technologist of fermentation and cultivation team

Moscow

Mazhed_zh@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0003-1613-5228ХапчаевЮ. Х.KhapchaevYu. Kh.

Юсуф Хаджи-Бекович Хапчаев – начальник цеха по производству полиомиелитных вакцин

Москва

Yusuf H. Khapchaev – Head of the Polio Vaccine Production Department

Moscow

hapchaev_uh@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0002-7251-6570СинюгинаА. А.SiniuginaA. A.

Александра Александровна Синюгина  – руководитель направления по  качеству и инновационным разработкам

Москва

Alexsandra A. Siniugina – Head of the Quality and Innovation Development Department

Moscow

sinyugina_aa@chumakovs.suhttps://orcid.org/0000-0001-6130-4145ИшмухаметовА. А.IshmukhametovA. A.

Айдар Айратович Ишмухаметов  – генеральный директор, ФГАНУ «Федеральный научный центр исследований и  разработки иммунобиологических препаратов им. М. П. Чумакова» РАН

Москва

Аydar A. Ishmukhametov – Director general, Federal State Autonomous Institution of Science «Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-andBiological Products» of Russian Academy of Sciences

Moscow

ishmukhametov@chumakovs.suФГАНУ «Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М. П. Чумакова» РАНРоссияFederal State Autonomous Institution of Science «Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immuneand-Biological Products» of Russian Academy of SciencesRussian FederationФГАНУ «Федеральный научный центр исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М. П. Чумакова» РАН; ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова МЗ России (Сеченовский Университет)РоссияFederal State Autonomous Institution of Science «Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immuneand-Biological Products» of Russian Academy of Sciences; Sechenov First Moscow State Medical University, of the Ministry of Health of the Russian FederationRussian Federation202219112022215107119Copyright © Пиняева А.Н., Ковпак А.А., Ивин Ю.Ю., Санджиева С.Х., Шишова А.А., Целых И.О., Василенко В.Е., Каа К.В., Мажед Ж.Х., Хапчаев Ю.Х., Синюгина А.А., Ишмухаметов А.А., 20222022Пиняева А.Н., Ковпак А.А., Ивин Ю.Ю., Санджиева С.Х., Шишова А.А., Целых И.О., Василенко В.Е., Каа К.В., Мажед Ж.Х., Хапчаев Ю.Х., Синюгина А.А., Ишмухаметов А.А.Piniaeva A.N., Kovpak A.A., Ivin Y.Y., Sandzhieva S.H., Shishova A.A., Tсelykh I.O., Vasilenko V.E., Kaa K.V., Mazhed Z.H., Khapchaev Y.K., Siniugina A.A., Ishmukhametov A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.epidemvac.ru/jour/article/view/1680Актуальность

Актуальность. Производство и контроль качества любых лекарственных средств жёстко регламентированы. В случае противовирусных вакцин требования к их безопасности и протективной активности с каждым годом ужесточаются. Во время разработки и производства иммунобиологических препаратов производители должны продемонстрировать достаточную очистку от технологических примесей, чтобы обеспечить чистоту препарата.

Цель

Цель. Подбор сорбентов и реагентов для хроматографии, проводимой с целью снижения количества технологических примесей при производстве инактивированной вакцины против полиомиелита.

Материалы и методы

Материалы и методы. Для получения вирусных суспензий культуру-продуцент заражали полиовирусом 1 типа (штамм Сэбина LSc 2ab), 2 типа (штамм Сэбина Р712 Ch 2ab) и 3 типа (штамм Сэбина Leon 12a1b). Множественность заражения составляла 0,02 ± 0,01 ТЦД50/клетка. Для оценки эффективности проведения ионообменной хроматографии определяли степень очистки фракций от балластных белков, степень очистки фракций от остаточной клеточной ДНК и степень извлечения целевого антигена рассчитывали по определенным формулам.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Было проведено более 80 экспериментов по очистке концентратов полиовируса 1 типа, 2 типа и 3 типа с использованием различных сорбентов. При контроле качества очищенных концентратов полиовирусов 1 типа, 2 типа и 3 типа помимо анализа на общий белок проводили анализ на наличие белков клеток Vero.

Заключение

Заключение. Применение предложенных модификаций очистки концентратов штаммов Сэбина вируса полиомиелита 1, 2 и 3 типов с помощью ионообменной хроматографии позволяют получать инактивированные вирусные препараты, отвечающие требованиям ВОЗ и Европейской Фармакопеи как по биохимическим показателям (содержание ДНК клеток-продуцентов и содержание балластных белков, в том числе белки клеток-продуцентов), так и по показателю специфической активности (содержание D-антигена). Кроме того, дополнительная очистка препаратов с использованием ионообменной хроматографии позволяет снизить содержание остаточной клеточной ДНК практически до нуля, что делает инактивированную вакцину против полиомиелита наиболее привлекательной для включения её в состав разных комбинированных вакцин.

Relevance

Relevance. The production and quality control of any drugs are strictly regulated. In the case of antiviral vaccines, the requirements for their safety and protective activity are getting tougher every year. Vaccine manufacturers face three tasks: ensuring high immunogenicity, safety and availability of the drug. During the development and production of immunobiological drugs, manufacturers must demonstrate sufficient purification from technological impurities to ensure the purity of the drug. Technological impurities directly depend on the technological process and the expression systems used. The Vero cell line has been widely used in the production of various antiviral vaccines for many decades. Thus, the improvement of technological processes for the purification of vaccine preparations from proteins and DNA of Vero cells is still matter of current interest.

Aims

Aims. Selection of resins and reagents for ion exchange chromatography to reduce the amount of technological impurities in the inactivated polio vaccine production.

Materials and Methods

Materials and Methods. To obtain viral suspensions, producer cultures were infected with poliovirus type 1 (Sabin strain LSc 2ab), type 2 (Sabin strain P712 Ch 2ab), and type 3 (Sabin strain Leon 12a1b). Multiplicity of infection was 0.02 ± 0.01 TCD50/cell. To evaluate the efficiency of ion-exchange chromatography we determined the degree of purification of fractions from ballast proteins, the degree of purification of fractions from residual cellular DNA, and the degree of extraction of the target antigen using specific formulas.

Results and discussion

Results and discussion. More than 80 experiments have been performed to purify type 1, type 2, and type 3 poliovirus concentrates using various sorbents. In quality control of purified concentrates of type 1, type 2 and type 3 polioviruses, in addition to analysis for total protein, an analysis was performed for the presence of Vero cell proteins.

Conclusion

Conclusion. The use of the proposed modifications of purification of concentrates of Sabin strains of poliovirus types 1, 2 and 3 using ion exchange chromatography allows to obtain inactivated viral products that meet the requirements of WHO and the European Pharmacopoeia both in biochemical parameters (the content of host-cell DNA and the content of ballast proteins, including host-cell proteins) and specific activity (D-antigen content). Furthermore, additional purification of vaccines using ion exchange chromatography allows to reduce the content of residual cellular DNA to almost zero, which makes the inactivated polio vaccine the most attractive for its inclusion in various combined vaccines.

инактивированная вакцина против полиомиелита (ИПВ)полиомиелитштаммы Сэбинаионообменная хроматографияклеточная линия Veroостаточная клеточная ДНКinactivated poliovirus vaccine (IPV)poliomyelitisSabin strainsion exchange chromatographyVero cell lineresidual cellular DNAReferencesОпимах И. Эдвард Дженнер и история вакцинации. Медицинские технологии. Оценка и выбор. 2018. С. 77–81. doi:10.31556/2219-0678.2018.34.4.077-081.Opimakh I. Edward Jenner and History of Vaccination. Medical Technologies. Assessment and Choice. 2018;77–81. doi:10.31556/2219-0678.2018.34.4.077-081.Wang X, Hunter A, Mozier N. Host Cell Proteins in Biologics Development: Identification, Quantitation and Risk Assessment. Biotechnology and Bioengineering. 2009; Vol. 103, No. 3. P. 446–458. doi: 10.1002/bit.22304.Wang X, Hunter A, Mozier N. Host Cell Proteins in Biologics Development: Identification, Quantitation and Risk Assessment. Biotechnology and Bioengineering. 2009; 103(3): 446–458. doi: 10.1002/bit.22304.Ягшис Г, Линдског Е, Лаки К и др. Биофармацевтическое производство. Разработка, проектирование и внедрение производственных процессов. Издательство Профессия; 2020.Jagschies G, Lindskog E, Lacki K, et. al. Biopharmaceutical production. Development, design and implementation of production processes. Publishing House Professia; 2020. (In Russ).Pilely K, Johansen M, Lund R, et al. Monitoring process-related impurities in biologics – host cell protein analysis. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2022. N.414. P. 747–758. doi: 10.1007/s00216021-03648-2.Pilely K, Johansen M, Lund R, et al. Monitoring process-related impurities in biologics – host cell protein analysis. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2022; 414:747–758. doi: 10.1007/s00216-02103648-2.Li M, Qiu Y. A review on current downstream bio-processing technology of vaccine products. Vaccine. 2013. N31. P. 1264–1267. doi: 10.1016/j.vaccine.2012.12.056.Li M, Qiu Y. A review on current downstream bio-processing technology of vaccine products. Vaccine. 2013; 31:1264–1267. doi: 10.1016/j.vaccine.2012.12.056.Montagnon B. Polio and rabies vaccines produced in continuous cell lines: a reality for Vero cell line. In: Continuous Cell Lines as substrates for biologicals. Dev. Biol. Stand. 1989. N70. P. 27-47.Montagnon B. Polio and rabies vaccines produced in continuous cell lines: a reality for Vero cell line. In: Continuous Cell Lines as substrates for biologicals. Dev. Biol. Stand. 1989; 70: 27–47.Piniaeva A, et al. Immunogenicity and safety of inactivated sabin-strain polio vaccine «PoliovacSin»: Clinical trials phase I and II. Vaccines. 2021. N9. P. 565. https://doi.org/10.3390/vaccines9060565.Piniaeva A, et al. Immunogenicity and safety of inactivated sabin-strain polio vaccine «PoliovacSin»: Clinical trials phase I and II. Vaccines. 2021;9:565. https://doi.org/10.3390/vaccines9060565.Vorovitch M, Grishina K, Volok V, et al. Evervac: phase I/II study of immunogenicity and safety of a new adjuvant-free TBE vaccine cultivated in Vero cell culture. Human Vaccines and Immunotherapeutics. 2020. N16. P. 2123–2130. doi: 10.1080/21645515.2020.1757990.Vorovitch M, Grishina K, Volok V, et al. Evervac: phase I/II study of immunogenicity and safety of a new adjuvant-free TBE vaccine cultivated in Vero cell culture. Human Vaccines and Immunotherapeutics. 2020; 16: 2123–2130. doi: 10.1080/21645515.2020.1757990.Pato T, Souza M, Mattos D, et al. Purification of yellow fever virus produced in Vero cells for inactivated vaccine manufacture. Vaccine. 2019. N37. P. 3214–3220. doi: 10.1016/j.vaccine.2019.04.077.Pato T, Souza M, Mattos D, et al. Purification of yellow fever virus produced in Vero cells for inactivated vaccine manufacture. Vaccine. 2019;37:3214–3220. doi: 10.1016/j.vaccine.2019.04.077.Tiwari M, Parida M, Santhosh S, et al. Assessment of immunogenic potential of Vero adapted formalin inactivated vaccine derived from novel ECSA genotype of Chikungunya virus. Vaccine. 2009. N27. P. 2513–2522. doi: 10.1016/j.vaccine.2009.02.062.Tiwari M, Parida M, Santhosh S, et al. Assessment of immunogenic potential of Vero adapted formalin inactivated vaccine derived from novel ECSA genotype of Chikungunya virus. Vaccine. 2009; 27:2513–2522. doi: 10.1016/j.vaccine.2009.02.062.Kovpak A, Ivin Y, Piniaeva A, et al. Application of ultrafiltration membranes for purificatiand concentration of sabin poliovirus type 1. Zhurnal Mikrobiologii Epidemiologii i Immunobiologii. 2021. Vol.98, N2. P. 135–143. doi: https://doi.org/10.36233/0372-9311-94.Kovpak A, Ivin Y, Piniaeva A, et al. Application of ultrafiltration membranes for purificatiand concentration of sabin poliovirus type 1. Zhurnal Mikrobiologii Epidemiologii i Immunobiologii. 2021. 98(2):135–143. doi: https://doi.org/10.36233/0372-9311-94.Piniaeva А, Kovpak A, Ivin Y, et al. Selection of Sorbent for Poliovirus Vaccine Strain Concentrate Purification by Gel Filtration. Biotekhnologiya. 2021. N37. P. 84–94. doi: 10.21519/0234-2758-2021-37-684-94.Piniaeva А, Kovpak A, Ivin Y, et al. Selection of Sorbent for Poliovirus Vaccine Strain Concentrate Purification by Gel Filtration. Biotekhnologiya. 2021;37:84–94. doi: 10.21519/0234-2758-2021-37-6-84-94.Yang H, Zhang L, Galinski M. A probabilistic model for risk assessment of residual host cell DNA in biological products. Vaccine. 2010. N28. P. 3308–3311. doi: 10.1016/j.vaccine.2010.02.099.Yang H, Zhang L, Galinski M. A probabilistic model for risk assessment of residual host cell DNA in biological products. Vaccine. 2010;28:3308–3311. doi: 10.1016/j.vaccine.2010.02.099.Andreani N, Renzi S, Piovani G, et al. Potential neoplastic evolution of Vero cells: in vivo and in vitro characterization. Cytotechnology. 2017. N69. P. 741–750. doi: 10.1007/s10616-017-0082-7.Andreani N, Renzi S, Piovani G, et al. Potential neoplastic evolution of Vero cells: in vivo and in vitro characterization. Cytotechnology. 2017; 69:741–750. doi: 10.1007/s10616-017-0082-7.Recommendations and guidelines for biological substances used in medicine and other documents. WHO TRS №897, Geneva, 2000.Recommendations and guidelines for biological substances used in medicine and other documents. WHO TRS №897, Geneva, 2000.European Pharmacopoeia (Ph. Eur.), 10th ed.; EDQM: Strasbourg, France.European Pharmacopoeia (Ph. Eur.), 10th ed.; EDQM: Strasbourg, France.Kalbfuss B, Wolff M, Morenweiser R, et al. Purification of cell culture-derived human influenza A virus by size-exclusion and anion-exchange chromatography. Biotechnology and Bioengineering. 2007. N96. P. 932–944. doi: 10.1002/bit.21109.Kalbfuss B, Wolff M, Morenweiser R, et al. Purification of cell culture-derived human influenza A virus by size-exclusion and anion-exchange chromatography. Biotechnology and Bioengineering. 2007; 96:932–944. doi: 10.1002/bit.21109.Kimia Z, Hosseini S, Talesh S, et al. A novel application of ion exchange chromatography in recombinant hepatitis B vaccine downstream processing: Improving recombinant HBsAg homogeneity by removing associated aggregates. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2019. N1113. P. 20–29. doi: 10.1016/j.jchromb.2019.03.009.Kimia Z, Hosseini S, Talesh S, et al. A novel application of ion exchange chromatography in recombinant hepatitis B vaccine downstream processing: Improving recombinant HBsAg homogeneity by removing associated aggregates. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2019; 1113:20–29. doi: 10.1016/j.jchromb.2019.03.009.INSTRUCTIONS IN 40 300 010. WorkBeads 40 / 100 SEC WorkBeads 40 / 10 000 SEC WorkBeads 40 / 1000 SEC WorkBeads Macro SEC. 2020. Bio-Works. Sweden.INSTRUCTIONS IN 40 300 010. WorkBeads 40 / 100 SEC WorkBeads 40 / 10 000 SEC WorkBeads 40 / 1000 SEC WorkBeads Macro SEC. 2020. Bio-Works. Sweden.Иванов А. П., Козлов В. Г., Клеблеева Т.Д., и др. Система иммуноферментного анализа на основе специфических антител класса (IgY) из яичных желтков для количественного определения D-антигена в инактивированных полиовирусных вакцинах. Вопросы вирусологии. 2014. №59. С. 39–42.Ivanov AP, Kozlov VG, Klebleeva TD, Ivanova OE, Kiktenko AV. An ELISA system based on the specific class Y (IgY) antibodies from egg yolks for the quantitative determination of D-antigen in inactivated poliovirus vaccines. Voprosy virusologii. 2014; 59(6):39–42. (in Russian).Capto S, Capto Q and Capto DEAE Ion exchange resins. Instructions for Use. 2020. Cytiva. Доступно на: https://cdn.cytivalifesciences.com/api/public/content/digi-14017-original28407452 AG. Capto S, Capto Q and Capto DEAE Ion exchange resins. Instructions for Use. 2020. Cytiva.CM Sepharose Fast Flow, DEAE Sepharose Fast Flow, Q Sepharose Fast Flow, SP Sepharose Fast Flow Ion Exchange Media. Instructions for Use. 2020. Cytiva. Доступно на: https://cdn.cytivalifesciences.com/api/public/content/digi-13013-original71500964 AH. CM Sepharose Fast Flow, DEAE Sepharose Fast Flow, Q Sepharose Fast Flow, SP Sepharose Fast Flow Ion Exchange Media. Instructions for Use. 2020. Cytiva.Thomassen Y, Van Eikenhorst G, Van Der Pol L, et al. Isoelectric point determination of live polioviruses by capillary isoelectric focusing with whole column imaging detection. Anal Chem. 2013. N85. P. 6089–6094. doi: 10.1021/ac400968q.Thomassen Y, Van Eikenhorst G, Van Der Pol L, et al. Isoelectric point determination of live polioviruses by capillary isoelectric focusing with whole column imaging detection. Anal Chem. 2013; 85:6089– 6094. doi: 10.1021/ac400968q. compliance of childhood vaccinations in the United States. Human Vaccines and Immunotherapeutics. 2017; 13:2494–2502. doi: 10.1080/21645515.2017.1362515.Liu B, Cao B, Wang C, et al. Immunogenicity and Safety of Childhood Combination Vaccines: A Systematic Review and Meta-Analysis. Vaccines (Basel). 2022. Vol. 10, N3. P. 472. doi: 10.3390/vaccines10030472.Liu B, Cao B, Wang C, et al. Immunogenicity and Safety of Childhood Combination Vaccines: A Systematic Review and Meta-Analysis. Vaccines (Basel). 2022; 10(3):472. doi: 10.3390/vaccines10030472.Намазова-Баранова Л. С., Харит С. М., Перминова О. А. и др. Безопасность и иммуногенность полностью жидкой шестивалентной вакцины АбКДСИПВ-ГепВ-Hib у здоровых детей 1-го года жизни в Российской Федерации. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2019;18(3):28–39. doi: 10.31631/2073-3046-2019-18-3-28-3926.Namazova-Baranova LS, Kharit SM, Perminova OA et al. Safety and Immunogenicity of Fully Liquid Hexavalent DTaP-IPV-HepB-Hib Vaccine in Healthy Infants in Russian Federation. Epidemiology and Vaccinal Prevention. 2019;18(3):28–39 (In Russ.). doi: 10.31631/2073-3046-2019-18-3-28-39Брико Н. И., Попович Л. Д., Миндлина А. Я. и др. Сравнительная оценка предотвращаемого социально-экономического ущерба при различных подходах к профилактике вакциноуправляемых инфекций в рамках Национального календаря профилактических прививок. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2020;19(1):4–13. doi: 10.31631/2073-30462020-19-1-4-13.Briko NI, Popovich LD, Mindlin AYa et al. Comparative assessment of preventable socioeconomic damage in different approaches to the prevention of vaccine-controlled infections in the framework of the National vaccination schedule. Epidemiology and Vaccinal Prevention. 2020;19(1): 4–13 (In Russ.). doi: 10.31631/2073-3046-2020-19-1-4-13.Суетина И. Г., Иллек Я. Ю., Хлебникова Н. В. и др. Проблема своевременности вакцинации детей раннего возраста и пути ее решения. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2019;18(5):85–91. doi: 10.31631/2073-3046-2019-18-5-85-91.Suetina IG, Illek YY, Khlebnikova NV. et al. The Problem of Timeliness of Young Children Vaccination and Ways to Solve It. Epidemiology and Vaccinal Prevention. 2019;18(5): 85–91. (In Russ.). doi: 10.31631/2073-3046-2019-18-5-85-91.Loiacono M, Pool V, van Aalst Rю DTaP combination vaccine use and adherence: A retrospective cohort study. Vaccine. 2021. Vol. 39, N7. P. 1064-1071. doi: 10.1016/j.vaccine.2021.01.009Loiacono M, Pool V, van Aalst R, DTaP combination vaccine use and adherence: A retrospective cohort study. Vaccine. 2021;39(7):1064-1071. doi: 10.1016/j.vaccine.2021.01.009.Kurosky S, Davis K, Krishnarajah G. Effect of combination vaccines on completion and compliance of childhood vaccinations in the United States. Human Vaccines and Immunotherapeutics. 2017. N13. P. 2494–2502. doi: 10.1080/21645515.2017.1362515Kurosky S, Davis K, Krishnarajah G. Effect of combination vaccines on completion and compliance of childhood vaccinations in the United States. Human Vaccines and Immunotherapeutics. 2017; 13:2494–2502. doi: 10.1080/21645515.2017.1362515.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.