epidemiologyЭпидемиология и ВакцинопрофилактикаEpidemiology and Vaccinal Prevention2073-30462619-0494«Numicom» LLC10.31631/2073-3046-2016-15-3-83-93epidemiology-169Research ArticleВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКАVACCINAL PREVENTIONИзучение антигенных свойств рекомбинантного аналога белка NEF вируса иммунодефицита человекаStudy of Antigenic properties of Human immunodeficiency Virus NEF protein Recombinant AnalogАлаторцеваГ. И.AlatortsevaG. I.alatortseva@gmail.comНосикМ. Н.NosikM. N.mnossik@yandex.ruНестеренкоЛ. Н.NesterenkoL. N.lnnesterenko@pochta.ruАмиантоваИ. И.AmiantovaI. I.amianti@yandex.ruДоценкоВ. В.DotsenkoV. V.VerraMal@gmail.comЛухверчикЛ. Н.LuhverchikL. N.lexx294@yandex.byЖукинаМ. В.ZhuckinaM. V.alatortseva@gmail.comКабаргинаВ. Ю.KabarginaV. U.v.cabargina@yandex.ruКудрявцеваЕ. Н.KudryavtsevaE. N.kudravtseva@mail.ruЗверевВ. В.ZverevV. V.vitalyzverev@outlook.comФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»РоссияMechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского»РоссияState Budgetary Institution of Public Health of Moscow Region «M.F. Vladimirsky Moscow Regional Research Clinical Institute»Russian Federation2016200620161538393Copyright © Алаторцева Г.И., Носик М.Н., Нестеренко Л.Н., Амиантова И.И., Доценко В.В., Лухверчик Л.Н., Жукина М.В., Кабаргина В.Ю., Кудрявцева Е.Н., Зверев В.В., 20162016Алаторцева Г.И., Носик М.Н., Нестеренко Л.Н., Амиантова И.И., Доценко В.В., Лухверчик Л.Н., Жукина М.В., Кабаргина В.Ю., Кудрявцева Е.Н., Зверев В.В.Alatortseva G.I., Nosik M.N., Nesterenko L.N., Amiantova I.I., Dotsenko V.V., Luhverchik L.N., Zhuckina M.V., Kabargina V.U., Kudryavtseva E.N., Zverev V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.epidemvac.ru/jour/article/view/169

Белок р27/р25 - продукт гена nef вируса иммунодефицита человека - многофункциональный фактор патогенности ВИЧ. Антигенные свойства рекомбинантного полипептида NEF, содержащего слитный с ß-галактозидазой E. coli N-концевой фрагмент белка р27 ВИЧ-1, исследованы с применением серологических и вирусологических методов. Методами ИФЛ, Вестерн-блоттинга и линейного иммуноаналаза показано взаимодействие рекомбинантного антигена NEF и сывороток крови ВИЧ-инфицированных пациентов и отсутствие положительных реакций с сыворотками крови здоровых людей. Лнтигенная специфичность рекомбинантного антигена подтверждена в реакциях с коммерческим аналогом белка р27/р25 ВИЧ-1 и с поликлональными антителами к синтетическим пептидам, соответствующим N- и С-концевым участкам белка р27/р25 ВИЧ-1. Показано взаимодействие IgG кроликов, иммунизированных рекомбинантным антигеном NEF, с вирусными антигенами в реакциях непрямой иммунофлуоресценции и нейтрализации. Таким образом, экспериментально обоснована возможность применения рекомбинантного белка NEF в качестве антигена в диагностических и исследовательских целях.

Protein p27/p25 is a product of HIV nef gene and is a multifunctional factor of HIV pathogenicity. Antigenic properties of recombinant NEF polypeptide which includes N-terminal fragment of HIV-1 p27 protein fused to E. coli ß-galactosidase were studied by serological and virological methods. The interaction was shown between recombinant NEF antigen and serums of HIV-positive individuals by ELISA, Western blot and line immunoassay. There was no interaction with sera of healthy individuals. The antigen specificity of recombinant antigen was shown in the reactions with commercial HIV-1 p27/p25 protein analog and with polyclonal antibodies to synthetic peptides corresponding to N-, C-terminal regions of HIV-1 p27/p25 protein. The interaction between IgG of rabbits immunized with recombinant NEF antigen and viral antigens was shown by indirect immunofluorescence and neutralizing assays. Thus it was proven the possibility of using recombinant NEF protein as an antigen for diagnostic and experimental purposes.

вирус иммунодефицита человекаВИЧ-1ген nefрекомбинантный антиген NEFиммуноферментный анализВестерн-блоттинглинейный иммуноанализметод непрямой иммунофлуоресценцииреакция нейтрализацииHuman Immunodeficiency VirusHIV-1nef geneglycoprotein Grecombinant NEF antigenenzyme immunoassayWestern blotline immunoassayindirect immunofluorescenceneutralizing assayReferencesМетодическое письмо № 4174-РХ от 04.08.2006 г. Проведение лабораторного обследования на ВИЧ-инфекцию (в том числе исследование иммунитета и вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции): 1 - 19.Methodological letter No. 4174-PX dated 04.08.2006. Laboratory testing for HIV infection (including the study of immunity and viral load in HIV infection): 1 – 19 (in Russia).Kim S.Y., Byrn R., Groopman J., Baltimore D. Temporal aspects of DNA and RNA synthesis during human immunodeficiency virus infection: Evidence for differential gene expression. J. Virol. 1989. 63: 3708 - 3713.Kim S.Y., Byrn R., Groopman J., Baltimore D. Temporal aspects of DNA and RNA synthesis during human immunodeficiency virus infection: Evidence for differential gene expression. J. Virol. 1989. 63: 3708 – 3713.Pandori M.W., Fitch N.J., Craig H.M. Richman D.D., Spina C.A., Guatelli J.C. Producer-cell modification of human immunodeficiency virus type 1: Nef is a virion protein. J. Virol. 1996. 70: 4283 - 4290.Pandori M.W., Fitch N.J., Craig H.M. Richman D.D., Spina C.A., Guatelli J.C.. Producer-cell modification of human immunodeficiency virus type 1: Nef is a virion protein. J. Virol. 1996. 70: 4283 – 4290.Wieland U., K hn J.E., Jassoy C., R bsamen-Waigmann H., Wolber V., Braun R. Antibodies to recombinant HIV-1 NEF, tat, and nef proteins in human sera Medical Microbiology and Immunology. 1990. 179. 1: 1 - 11.Wieland U., Kühn J.E., Jassoy C., Rübsamen-Waigmann H., Wolber V., Braun R. Antibodies to recombinant HIV-1 NEF, tat, and nef proteins in human sera Medical Microbiology and Immunology. 1990. 179. 1: 1 – 11.O'Neil C., Lee D., Clewley G., Johnson M.A., Emery V.C. Prevalence of anti-NEF antibodies in HIV-1 infected individuals assessed using recombinant baculovirus expressed NEF protein. J. Med. Virol. 1997: 139 - 44.O'Neil C., Lee D., Clewley G., Johnson M.A., Emery V.C. Prevalence of anti-NEF antibodies in HIV-1 infected individuals assessed using recombinant baculovirus expressed NEF protein. J. Med. Virol. 1997: 139 – 44.Frahma N., Lindea C., Brander C. Identi cation of HIV-Derived, HLA Class I Restricted CTL Epitopes: Insights into TCR Repertoire, CTL Escape and Viral Fitness. HIV Molecular Immunology. 2006: 3 - 28.Frahma N., Lindea C., Brander C. Identification of HIV-Derived, HLA Class I Restricted CTL Epitopes: Insights into TCR Repertoire, CTL Escape and Viral Fitness.HIV Molecular Immunology. 2006: 3 – 28.Алаторцева Г.И., Нестеренко Л.Н., Волынская Е.А., Амиантова И.И., Кабаргина В.Ю., Жукина М.В. и др. Получение рекомбинантного полипептида, содержащего антигенные детерминанты белка nef ВИЧ-1 и его применение для диагностики ВИЧ-инфекции методом линейного иммуноблоттинга. Труды XI Международного конгресса «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии». Российский аллергологический журнал. 2011. 4 (1): 12 - 14.Alatortseva G.I., Nesterenko L.N., Volynskaya E.A., Amiantova I.I., Kabargina V.Y., Zukina M.V., Dotsenko V.V., Kudryavtseva E.N., Chartchenko O.S., Goltsov V.A., Zverev V.V. Production of recombinant polypeptide containing antigenic determinants of HIV-1 nef protein and its application for diagnosis of HIV infection by the line blot. Рroceedings of the XI international Congress on modern problems of аllergology, immunology and immunopharmacology. Russian Allergology J. 2011. 1 (4): 12 – 14 (in Russia).Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ. 1992. № 2043409 на изобретение «Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков».Alatortsev V.E., Alatortseva G.I. Strain of bacterium Escherichia coli used for ecombinant proteins preparing. Patent RF, № 2043409; 1995 (in Russian).Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Патент РФ.1992. № 2071501 на изобретение «Вектор pEL5a, предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК».Alatortsev V.E., Alatortseva G.I. Vector pel5а designated for foreign DNA expression. Patent RF, № 2071501; 1992 (in Russian).Новое в клонировании ДНК. Методы. Ред. Гловер Д., Москва, 1989: 122 - 128.News in DNA cloning. A practical approach. Ed. Glover D.M. Moscow, 1989: 122 – 128 (in Russian).Sameh Magdeldin and Annette Moser. Affinity Cromatography: Principles and Applications, Affinity Chromatography. Ed.: S. Magdeldin. In Tech. 2012: 70 - 75.Sameh Magdeldin and Annette Moser. Affinity Cromatography: Principles and Applications, Affinity Chromatography. Ed.: S. Magdeldin. In Tech. 2012: 70 – 75.Virca G.D., Travis J., Hall P.K., Roberts R.C. Purification of -2-Macroglobulin by Chromatography on Cibacron Blue Sepharose. Analytical Biochemistry. 1978. 8: 274 - 276.Virca G.D., Travis J., Hall P.K., Roberts R.C. Purification of α-2-Macroglobulin by Chromatography on Cibacron Blue Sepharose. Analytical Biochemistry. 1978. 8: 274 – 276.Rattana Wongchuphan, Beng Ti Tey, Wen Siang Tan, Senthil Kumar Subramanian, Farah Saleena Taip, Tau Chuan Ling. Purification of rabbit polyclonal immunoglobulin G using anion exchangers. Process Biochemistry 2011. 46: 101 - 107.Rattana Wongchuphan, Beng Ti Tey, Wen Siang Tan, Senthil Kumar Subramanian, Farah Saleena Taip, Tau Chuan Ling. Purification of rabbit polyclonal immunoglobulin G using anion exchangers. Process Biochemistry 2011. 46: 101 – 107.Практическая химия белка. А. Дарбре, ред. Пер. с англ. Москва. 1989: 1 - 621.Practical Protein Chemistry. А Handbook. Ed.: А. Darbre. Moscow, 1989: 1 – 621 (in Russian).Towbin H., Staehlin T., Gordon Y. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Proce-dure and some applications. Proc. nat. Acad. Sci. USA. 1979; 76: 4350 - 4359.Towbin H., Staehlin T., Gordon Y. Proc. nat. Acad. Sci. USA. 1979; 76: 4350 – 4359.Носик М.Н., Рыжов К.А., Киселева И.А., Кравченко А.В., Покровский В.В. Биологические свойства штаммов вируса иммунодефицита человека, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц на территории России за 2009-2010 гг. ЗНиСО. 2011; 4 (217): 31 - 34.Nosik M.N., Ryzhov K.A., Kiseleva I.A., Kravtchenko A.V., Pokrovsky V.V. Biological properties of Human Immunodeficiency Virus strains isolated from HIVinfected individuals living in the territory of Russia over period of 2009-2010 year. ZniSO. 2011; 4 (217): 31 – 34 (in Russia).End point neutralization assay. WHO Guidelines for Standart HIV Isolation Procedures 1994, 1998 update.End point neutralization assay. WHO Guidelines for Standart HIV Isolation Procedures 1994, 1998 update.McCoy L.E., Weiss R.A. Neutralizing antibodies to HIV-1 induced by immunization. J. Exp. Med. 2013; 210 (2): 209 - 223.McCoy L.E., Weiss R.A. Neutralizing antibodies to HIV-1 induced by immunization. J. Exp. Med. 2013; 210 (2): 209 – 223.Pleguezuelos O., Stoloff G.A., Caparr s-Wanderley W. Synthetic immunotherapy induces HIV virus specific Th1 cytotoxic response and death of an HIV-1 infected human cell line through classic complement activation. Virology Journal. 2013; 10: 107 - 120.Pleguezuelos O., Stoloff G.A., Caparrós-Wanderley W. Synthetic immunotherapy induces HIV virus specific Th1 cytotoxic response and death of an HIV-1 infected human cell line through classic complement activation. Virology Journal. 2013; 10: 107 – 120.Chen Y.M., Lin R.H., Lee C.M., Fu C.Y., Chen S.C., Syu W.J. Decreasing levels of anti-Nef antibody correlate with increasing HIV type 1 viral loads and AIDS disease progression. AIDS Res. Hum Retroviruses. 1999; 15 (1): 43 - 50.Chen Y.M., Lin R.H., Lee C.M., Fu C.Y., Chen S.C., Syu W.J. Decreasing levels of anti-Nef antibody correlate with increasing HIV type 1 viral loads and AIDS disease progression. AIDS Res. Hum Retroviruses. 1999; 15 (1): 43 – 50.Duri K., M ller F., Gumbo F.Z., Kurewa N.E., Rusakaniko S., Chirenje M.Z. et al. Human immunodeficiency virus (HIV) types Western blot (WB) band profiles as potential surrogate markers of HIV disease progression and predictors of vertical transmission in a cohort of infected but antiretroviral therapy na ve pregnant women in Harare, Zimbabwe. BMC Infect. Dis. 2011; 11: 7.Duri K., Miller F., Gumbo F.Z., Kurewa N.E., Rusakaniko S., Chirenje M.Z. et al. Human immunodeficiency virus (HIV) types Western blot (WB) band profiles as potential surrogate markers of HIV disease progression and predictors of vertical transmission in a cohort of infected but antiretroviral therapy naïve pregnant women in Harare, Zimbabwe. BMC Infect. Dis. 2011; 11: 7.Opendra Narayan, Zhenqian Liu. HIV DNA vaccine imposition and methods of use. Patent USA. 2011. № 8,003,113 B2.Opendra Narayan, Zhenqian Liu. HIV DNA vaccine сomposition and methods of use. Patent USA. 2011. № 8,003,113 B2.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.