Обухова Екатерина Андреевна, научный сотрудник, ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии»
143980, Московская обл., г. Балашиха, мкр. Железнодорожный, ул. Андрея Белого, д. 1, кв. 791
Obukhova Ekaterina A., researcher
1, 791 sq., Andrey Bely str., md. Zheleznodorozhny, Balashikha, Moscow region, 143980
Василий Геннадьевич Акимкин – директор
143980, Московская обл., г. Балашиха, мкр. Железнодорожный, ул. Андрея Белого, д. 1, кв. 791
Vasily G. Akimkin – Director
1, 791 sq., Andrey Bely str., md. Zheleznodorozhny, Balashikha, Moscow region, 143980
Актуальность. В России ежегодно регистрируются завозные случаи малярии, преимущественно из стран Африки и Юго-Восточной Азии. Несмотря на отсутствие местной передачи заболевания на территории страны с 2018 г., сохраняется риск завоза и распространения инфекции, что требует надежных методов диагностики для оперативного реагирования. В глобальном масштабе малярия остается одной из наиболее значимых угроз общественному здоровью в эндемичных регионах. С 2007 г. 25 апреля отмечается Всемирный день борьбы с малярией – это подчеркивает важность борьбы с этой инфекцией, заключающейся в консолидации усилий по совершенствованию диагностики, профилактики и лечения заболевания. Существующие методы диагностики, такие как микроскопия и иммунохроматографические тесты, имеют ограничения по чувствительности, специфичности и пригодности для массового скрининга.
Цель. Разработать и валидировать набор реагентов для диагно- стики малярии на основе метода петлевой изотермической амплификации (LAMP), оценить его диагностическую эффектив- ность.
Материалы и методы. В работе представлена разработка и валидация набора реагентов AmpliSens® Plasmodium-IT для качественного выявления ДНК патогенных видов малярийных плазмодиев (P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale, Р. knowlesi) методом LAMP с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Аналитическую чувствительность оценивали с использованием серийных разведений ДНК плазмодиев. Оценку диагностической чувствительности и специфичности проводили на клинических образцах цельной венозной крови, охарактеризованных с помощью ПЦР.
Результаты. Разработанный набор реагентов обладает высокой аналитической чувствительностью (предел обнаружения 10³ ГЭ/мл), 100 % диагностической чувствительностью и специфичностью при тестировании клинических образцов цельной крови. Время анализа составляет 25–30 минут, а положительный сигнал при высокой паразитемии регистрируется уже через 3–12 минут.
Заключение. Разработанный набор реагентов представляет собой быстрый, точный инструмент для диагностики малярии, пригодный для использования в стационарных лабораториях для эпидемиологического надзора и скрининга.
Relevance. Imported malaria cases are registered annually in Russia, mainly originating from African and Southeast Asian countries. Although there has been no local transmission of the disease within the country since 2018, the risk of importation and spread of the infection remains. This necessitates reliable diagnostic methods for rapid response. Globally, malaria remains one of the most significant public health threats in endemic regions. Since 2007, World Malaria Day has been observed on April 25, underscoring the importance of consolidating efforts in the diagnosis, prevention, and treatment of the disease. Current diagnostic methods, such as microscopy and immunochromatographic tests, have limitations in terms of sensitivity, specificity, and suitability for mass screening.
Aims. To develop and validate a reagent kit for malaria diagnosis based on loop mediated isothermal amplification (LAMP) method, and to assess its diagnostic performance.
Materials and methods. This study presents the development and validation of the AmpliSens® Plasmodium-IT reagent kit for the qualitative detection of DNA from pathogenic malaria Plasmodium species (P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale, P. knowlesi) using LAMP with real-time fluorescent detection. Detection limit was assessed using serial dilutions of Plasmodium DNA. The diagnostic sensitivity and specificity were evaluated using clinical samples of whole venous blood characterized by PCR.
Results. The developed reagent kit demonstrates high analytical sensitivity (detection limit: 103 GE/mL), 100 % diagnostic sensitivity, and 100 % specificity when tested on clinical whole-blood samples. The analysis time is 25–30 minutes, and a positive signal in cases of high parasitemia is detected within 3–12 minutes.
Conclusion. The developed reagent kit is a fast and accurate tool for malaria diagnosis, suitable for use in stationary laboratories for epidemiological surveillance and screening.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.