epidemiologyЭпидемиология и ВакцинопрофилактикаEpidemiology and Vaccinal Prevention2073-30462619-0494«Numicom» LLC10.31631/2073-3046-2019-18-1-50-54epidemiology-661Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESПерспективный подход к оценке качества вакцины чумной живой по показателю иммуногенностиPerspectives approach to the assessment of the quality of the vaccine plague live in terms of immunogenicity. Epidemiology and Vaccinal PreventionГостищеваС. Е.GostischevaS. E.

Светлана Евгеньевна Гостищева – биолог Научно-производственной лаборатории чумных вакцин

355035, Россия, г. Ставрополь, ул. Советская, 13–15.  Тел./факс: +7 (865-2) 26-20-50.+7 906-472-08-28

Svetlana E. Gostischeva – biologist оf scientific and production laboratory of plague vaccines

355035, Stavropol,St. Soviet, 13–15. +7 (865-2) 26-20-50

chumnpl@yandex.ruАбзаеваН. В.AbzaevaN. V.

Наталья Вячеславовна Абзаева – к. б. н., заведующая

тел.: +7 909-750-92-38

Natalia V. Abzaeva – Cand. Sci. (Biol.), head of the production laboratory of plague vaccine research and production

РакитинаЕ. Л.RakitinaE. L.

Ekaterina L. Rakitina – Cand. Sci. (Med.), doctor of clinical laboratorydiagnostics, sector IiPOOIz laboratory brucellosis

ПономаренкоД. Г.PonomarenkoD. G.КостюченкоМ. В.KostuchenkoM. V.ЛогвиненкоО. В.LogvinenkoO. V.КуличенкоА. Н.KulichenkoA. N.

Александр Николаевич Куличенко – член-корр. РАН, доктор медицинских наук, профессор, директор

355035, Россия, г. Ставрополь, ул. Советская, 13–15.  Тел./факс: +7 (865-2) 26-20-50

Alexander N. Kulichenko – Corresponding Member оf Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Med.), Professor, Director

355035, Stavropol, St. Soviet, 13–15. +7 (865-2) 26-20-50

 

chumnpl@yandex.ruФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора, г. СтавропольРоссияStavropol Plague Control Research InstituteRussian Federation2019110320191815054Copyright © Гостищева С.Е., Абзаева Н.В., Ракитина Е.Л., Пономаренко Д.Г., Костюченко М.В., Логвиненко О.В., Куличенко А.Н., 20192019Гостищева С.Е., Абзаева Н.В., Ракитина Е.Л., Пономаренко Д.Г., Костюченко М.В., Логвиненко О.В., Куличенко А.Н.Gostischeva S.E., Abzaeva N.V., Rakitina E.L., Ponomarenko D.G., Kostuchenko M.V., Logvinenko O.V., Kulichenko A.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.epidemvac.ru/jour/article/view/661

Цель исследования – изучение возможности применения антиген-стимулированных клеточных тестов in vitro и технологии цитометрического анализа для контроля иммуногенной активности производственных серий вакцины чумной живой.

Материалы и методы

Материалы и методы. В качестве биомоделей использовали белых лабораторных мышей, иммунизированных коммерческим препаратом вакцины чумной живой из штамма Yersinia pestis EV линии НИИЭГ в дозах – 8 х 102, 4 х 103, 2 х 104 и 1 х 105 живых микробных клеток. Кровь для исследования брали у интактных мышей и на 7, 14 и 21 сут после иммунизации. Интенсивность антигенреактивности лимфоцитов определяли в клеточных тестах in vitro, анализируя маркер ранней активации (CD45+CD3+CD25+) лимфоцитов с использованием конъюгированных с флуорохромами моноклональных антител. В качестве специфического антигена использовали комплекс водорастворимых антигенов чумного микроба.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. В результате исследования показано, что у животных, вакцинированных дозами 4 х 103 –1 х 105 живых микробных клеток, наивысший уровень экспрессии лимфоцитами маркера активации при антигенной стимуляции in vitro регистрируется на 14 сут после иммунизации, при этом количество CD25-позитивных лимфоцитов в среднем в 6,8 раз выше, чем в контрольной группе. Установлена высокая степень прямой связи (коэффициент корреляции r = 1,000) количества выживших животных с увеличением уровня лимфоцитов, экспрессирующих маркеры ранней активации – CD25. Предлагаемая методика может быть использована в качестве дополнительного теста при изучении степени иммуногенности новых (кандидатных) вакцин против чумы.

 

 

Research objective – studying of a possibility of application antigen – stimulated cellular in vitro tests and technology of the cytometric analysis for control of immunogene activity of batches of vaccine plague live.

Materials and methods

Materials and methods. As biomodels used white laboratory mice, immunized commercial medicine of vaccine of the plague NIIEG line, live from a strain of Yersinia pestis EV, in doses – 8 х 102, 4 х 103, 2 х 104 and 1 х 105 of living microbic cells. Blood for a research was taken from intact mice and on 7, 14 and 21 days after immunization. The intensity of an antigenreaktivnost of lymphocytes was defined in cellular in vitro tests, analyzing a marker of early activation (CD45+CD3+CD25+) of lymphocytes with use of the monoclonal antibodies conjugated from fluorokhroma. As specific antigen used a complex of water-soluble antigens of a plague microbe.

Results

Results. As a result of a research it is shown that at the animals vaccinated by doses 4 х 103 – 1 х 105 living microbic cells, the highest level of an expression activation marker lymphocytes at anti-gene stimulation of in vitro is registered on 14 days after immunization, at the same time the quantity of CD25 – positive lymphocytes are on average 6.8 times higher, than in control group. High degree of direct link (coefficient of correlation of r = 1,000) quantities of the survived animals with increase in level of lymphocytes, expressiruyushchy markers of early activation – CD25 is established.

Conclusions

Conclusions. The offered technique can be used as the additional test when studying degree of immunogenicity of new (kandidatny) vaccines against plague.

иммуногенностьпротивочумный иммунитетпроточная цитофлуориметриямаркер активации лимфоцитовкомплекс водорастворимых антигенов Yersinia pestisimmunogenicityimmunity against plagueflowing tsitofluorimetriyamarker of activation of lymphocytescomplex of watersoluble antigens Yersinia pestiswhite miceReferencesФармакопейная статья предприятия ФСП 42-8654-07 ЛСР-005759/08-220708 «Вакцина чумная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций». Ставрополь; 2007.Pharmacopoeial article of the enterprise FSP 42-8654-07 LSR-005759/08-220708 Vaccine plague alive, lyophilizate for the preparation of suspension for injections, cutaneous scarification and inhalation; 2007. (In Russ.)Апарин Г.П., Вершинина Т.И. Методические рекомендации по определению степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба для белых мышей. Иркутск; 1984.Aparin GP, Vershinina TI. Methodological recommendations for determining the degree of immunogenicity of avirulent strains of plague microbe for white mice. Irkutsk; 1984. (In Russ.)Костюченко М.В., Пономаренко Д.Г., Ракитина Е.Л. и др. Перспектива оценки антигенреактивности лимфоцитов in vitro для диагностики острого бруцеллеза // Инфекция и иммунитет. 2017. Т. 7, № 1. С. 91–96.Kostyuchenko MV, Ponomarenko DG, Rakitina EL, et al. The prospect of evaluating the antigen reactivity of lymphocytes in vitro for the diagnosis of acute brucellosis. Infekciya i immunitet [Infection and immunity]. 2017;7(1):91–96. (In Russ.)Рыжикова С.Л., Дружинина Ю.Г., Рябичева Т.Г. и др. Продукция цитокинов клетками крови как показатель напряженности поствакцинального клеточного иммунитета // Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8, № 1. С. 57–61.Ryzhikova SL, Druzhinina YuG, Ryabicheva TG, et al. Production of cytokines by blood cells as an indicator of the intensity of postvaccinal cellular immunity. Citokiny i vospalenie [Cytokines and inflammation]. 2009;8(1):57–61. (In Russ.)Саркисян Н.С., Пономаренко Д.Г., Логвиненко О.В., и др. Интенсивность специфической сенсибилизации и иммунный статус у больных бруцеллезом // Медицинская иммунология. 2016. Т. 18, № 4. С. 365–372.Sarkisyan NS, Ponomarenko DG, Logvinenko OV, et al. Intensity of specific sensitization and immune status in patients with brucellosis. Medicinskaya immunologiya [Medical immunology]. 2016;18(4):365–372. (In Russ.)Щуковская Т.Н., Фирстова В.В., Кравцов А.Л. и др. Оценка приобретенного иммунитета против сибирской язвы по степени повреждения лейкоцитов крови in vitro антраксином // Проблемы особо опасных инфекций. 2007. № 93. С. 81–84.Shchukovskaya TN, Firstova VV, Kravtsov AL. Evaluation of acquired immunity against anthrax in terms of the degree of damage of blood leukocytes in vitro with anthraxin. Problemy osobo opasnyh infekcij [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2007;93:81–84. (In Russ.)Куличенко А.Н., Абзаева Н.В., Гостищева С.Е. и др. Использование антигенспецифических клеточных тестов in vitro для оценки формирования поствакцинального противочумного иммунитета // Инфекция и иммунитет. 2017. Т. 7, № 2. С. 203–208.Kulichenko AN, Abzaeva NV, Gostishcheva SE, et al. Use of antigen-specific cell tests in vitro to assess the formation of post-vaccinal antiplague immunity. Infekciya i immunitet [Infection and immunity]. 2017;7(2):203–208. (In Russ.)Sakaguchi S. Naturally arising Foxp3-expressing CD25+ CD4+ regulatory T cells in immunological tolerance to self and non-self // J Nat Immunol. 2005. Vol. 6, N 4. P. 345–352.Sakaguchi S. Naturally arising Foxp3-expressing CD25+ CD4+ regulatory T cells in immunological tolerance to self and non-self. J Nat Immunol. 2005; 6(4):345–352. doi: 10.1038/ni1178Firstova V.V., Mokrievich A.N., Pavlov V.M., et al. Immunological Markers that Correlate with Protection Immunity Against Tularemia Infection // Advances in Experimental Medicine and Biology. 2014. N 808. P. 15–23.Firstova VV, Mokrievich AN, Pavlov VM, et al. Immunological Markers that Correlate with Protection Immunity Against Tularemia Infection. Advances in Experimental Medicine and Biology. 2014;808:15–23. doi: 10.1007/978-81-322-1774-9_2.Афанасьев Е.Н., Таран И.Ф., Тюменцева И.С. Антигенная структура бруцелл. Сообщ. I. Сравнительная оценка методов выделения водорастворимых антигенов бруцелл. Ставрополь; 1986.Afanasiev EN, Taran IF, Tyumentseva IS. Antigenic structure of Brucella. Messaging. I. Comparative evaluation of methods for the isolation of water-soluble antigens brutsell. Stavropol; 1986. (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.