Разработка и исследование диагностической эффективности набора реагентов для выявления антител класса М к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western blot»
https://doi.org/10.31631/2073-3046-2020-19-3-57-63
Аннотация
Актуальность. При серологической диагностике краснухи методом иммуноферментного анализа, направленного на выявление антител класса М, возможно получение сомнительного или ложноположительного результата. В данном случае необходимо дополнительное подтверждающее исследование, которое может быть проведено методом иммунного блоттинга, позволяющим выявить антитела к отдельным антигенам вируса краснухи. На сегодняшний день в Российской Федерации отсутствует подобный набор реагентов, что делают его разработку достаточно актуальной. Цель - разработка отечественной тест-системы для выявления антител класса М к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western blot». Материалы и методы. Для получения иммуносорбента новой тест-системы использовали электрофорез нативного лизата вируса краснухи в полиакриламидном геле с целью разделения входящих в его состав белков по молекулярному весу и последующий электроперенос (блоттинг) разделенных белков на нитроцеллюлозную мембрану. Для оценки чувствительности и специфичности новой тест-системы использовали стандартные панели сывороток, содержащих и не содержащих IgM к вирусу краснухи, а также охарактеризованные методом ИФА образцы клинического материала. Результаты и их обсуждение. В результате проведенной работы была создана отечественная тест-система, позволяющая выявлять антитела класса М к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга, аналитическая чувствительность и специфичность которой составили 100%, а диагностическая чувствительность и специфичность - не менее 99,61% и не менее 99,99% соответственно. Итоговая оценка диагностической эффективности составила не менее 99,5%. Выводы. Разработанная тест-система обладает высокими показателями аналитической и диагностической чувствительности и специфичности, а также высокой диагностической эффективностью. Она предназначена для проведения подтверждающих исследований в диагностике краснушной инфекции.
Об авторах
С. Г. Марданлы
Государственный гуманитарно-технологический университет; АО «ЭКОлаб»
Россия
Россия
Марданлы Сейфаддин Гашимович - доктор медицинских наук, профессор кафедры фармакологии и фармацевтических дисциплин ГГТУ, президент и директор по науке ЗАО «ЭКОлаб».
Орехово-Зуево; Электрогорск.
+7(49643) 3-13-74, 3-17-45, 3-35-29А. С. Авдонина
ЗАО «ЭКОлаб»
Россия
Россия
Авдонина Александра Сергеевна - начальник отдела перспективных разработок ЗАО «ЭКОлаб».
Электрогорск.
+7(49643)3-13-74, 3-17-45, 3-35-29Список литературы
1. Ноздрачева А. В., Семененко Т. А., Марданлы С. Г. и др. Оценка напряженности гуморального иммунитета к кори и краснухе у беременных женщин в Москве. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017. № 3. - С. 91-98.
2. Краснуха. Информационный бюллетень ВОЗ. Октябрь 2019 г. Доступно на: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/rubella. Ссылка активна на 05.06.2020.
3. Марданлы С. Г. Эпидемиологический надзор за инфекциями TORCH-группы на основе современных технологий лабораторной диагностики: Дисс.... д-ра мед. наук. - Москва, 2016.
4. Марданлы С. Г., Симонова Е. Г., Симонов В. В. Инфекции TоRCH-группы: клиническая лабораторная диагностика, эпидемиологический надзор и контроль. -Орехово-Зуево: Издательство ГГТУ; 2018.
5. Best J.M., O'Shea S., Tipples G., et al. Interpretation of rubella serology in pregnancy - pitfalls and problems. // BMJ. 2002. Vol. 325. P. 147-148.
6. Dwyer D.E., Robertson P.W., Fields P.R. Broadsheet: clinical and laboratory features of rubella. // Pathology. 2001. Vol. 33. P. 322-328.
7. Aboudy Y., Barnea B., Yosef L., et al. Clinical rubella re-infection during pregnancy in a previously vaccinated woman. // J. Infect. 2000. Vol. 41. P. 187-189.
8. Morgan-Capner P., Hodgson J., Hambling M.H., et al. Detection of rubella-specific IgM in subclinical rubella reinfection in pregnancy. // Lancet. 1985. Vol. 1. P. 244-246.
9. Al-Nakib W., Best J.M., Banatvala J.E. Rubella-specific serum and nasopharygeal immunoglobulin responses following naturally acquired and vaccine-induced infection. Prolonged persistence of virus-specific IgM. // Lancet. 1975. Vol. 1. P. 182-185.
10. Banatvala J.E., Best J.M., O'Shea S., et al. Persistence of rubella antibodies after vaccination: detection after experimental challenge. // Rev. Infect. Dis. 1985. Vol. 1, № 7. P. 86-90.
11. Pattison J.R. Persistence of specific IgM after natural infection with rubella virus. // Lancet. 1975. Vol. 1. P. 185-187.
12. Wandinger K-P, Saschenbrecker S., Steinhagen K., et al. Diagnosis of recent primary rubella virus infections: Significance of glycoprotein-based IgM serology, IgG avidity and immunoblot analysis. // Journal of Virological Methods. 2011. Vol. 174, № 1-2. P. 85-93.
13. Meurman O.H., Ziola B.R. IgM-class rheumatoid factor interference in the solid-phase radioimmunoassay of rubella-specific IgM antibodies. // J. Clin. Pathol. 1978. Vol. 31. P. 483-487.
14. Morgan-Capner P., Tedder R.S., Mace J.E. Rubella-specific IgM reactivity in sera from cases of infectious mononucleosis. // J. Hyg. (Lond). 1983. Vol. 90. P. 407-413.
15. Thomas H.I., Barrett E., et al. Simultaneous IgM reactivity by EIA against more than one virus in measles, parvovirus B19 and rubella infection. // J. Clin. Virol. 1999. Vol. 14. P. 107-118.
16. Tipples G.A., Hamkar R., Mohktari-Azad T., et al. Evaluation of rubella IgM enzyme immunoassays. // J. Clin. Virol. 2004. Vol. 30. P. 233-238.
17. Chaye H.A.H., Mauracher Ch.A., Tingle A.J., et al. Cellular and Humoral Immune Responses to Rubella Virus Structural Proteins El, E2, and C. // Journal of Clinical Microbiology. 1992. Vol. 30. P. 2323-2329.
18. Cusi M.G., Metelli R., Valensin P.E. Immune responses to wild and vaccine rubella viruses af65 ter rubella vaccination. // Arch. Virol. 1989. Vol. 106. P. 63-72.
19. Dimech W., Grangeot-Keros L., Vauloup-Fellousb Ch. Standardization of Assays That Detect Anti-Rubella Virus IgG Antibodies. // Clinical Microbiology Reviews. 2016. Vol. 29, № 1. P. 163-174.
20. Mauracher C.A., Mitchell L.A., Shukin R., et al. pH-dependent solubility shift of rubella virus capsid protein. // Virology. 1991. Vol. 181. P. 773-777.
21. Nedeljkovic J., Jovanovic T., Mladjenovic S., et al. Immunoblot analysis of natural and vaccine-induced IgG responses to rubella virus proteins expressed in insect cells. // J. Clin. Virology. 1999. Vol. 14, № 2. P. 119-131.
22. Serdula M.K., Halstead S.B., Wiegenga N.H., et al. Serological response to rubella revaccination. // JAMA. 1984. Vol. 251. P. 1974-1977.
23. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.
24. Арсеньева В.А., Амелина Е.А., Марданлы С.Г. и др. Линейный иммуноблоттинг для одновременного выявления антител к основным возбудителям инфекций TORCH-группы. // Медицинский алфавит. 2017. Т. 2, №20(317). С. 43-48.
25. Антонов В.С. Вопросы статистической оценки результатов клинических испытаний медицинских изделий для in vitro диагностики. Доступно на: https://docplayer.ru/118768-Voprosy-statisticheskoy-ocenki-rezultatov-klinicheskih-ispytaniy-medicinskih-izdeliy-dlya-in-vitro-diagnostiki-antonov-v-s-zamestitel-generalno-go.html. Ссылка активна на 05.06.2020.
26. Чернов В.И., Есауленко И.Э., Родионов О.В. и др. Медицинская информатика: учеб. пособие. - Ростов н/Д: Феникс; 2007.
27. Dorsett P.H., Miller D.C., Green K.Y., et al. Structure and function of the rubella virus proteins. // Rev. Infect. Dis. 1985. Vol. 7. P. 150-156.
28. Petterson R.F., Oker-Blom C., Kalkkinen N., et al. Molecular and antigenic characteristics and synthesis of rubella virus structural proteins. // Rev. Infect. Dis. 1985. Vol. 7. P. 140-149.
29. Oker-Blom C., Kalkkinen N., Kaariainen L., et al. Rubella virus contains one capsid protein and three envelope glycoproteins, E1, E2a and E2b. // J. Virol. 1983. Vol. 46. P. 964-973.
Рецензия
Для цитирования:
Марданлы С.Г., Авдонина А.С. Разработка и исследование диагностической эффективности набора реагентов для выявления антител класса М к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western blot». Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2020;19(3):57-63. https://doi.org/10.31631/2073-3046-2020-19-3-57-63
For citation:
Mardanly S.G., Avdonina A.S. Development and Investigation of Diagnostic Efficiency of a Test Kit for the Detection of IgM-antibodies to Individual Antigens of Rubella Virus by Immunoblotting (Western Blot). Epidemiology and Vaccinal Prevention. 2020;19(3):57-63. (In Russ.) https://doi.org/10.31631/2073-3046-2020-19-3-57-63
Просмотров: 512
Послать статью по эл. почте 