Экспериментальная оценка возможности применения ЛАЛ-теста для определения бактериальных эндотоксинов в вакцинах для профилактики бешенства

Введение. На сегодняшний день наличие пирогенных примесей в готовых лекарственных формах концентрированных культуральных антирабических вакцин, производимых на территории РФ, определяют с помощью испытаний на кроликах (in vivo). В решении Коллегии Евразийской экономической комиссии от 7 сентября 2018 г. № 151 «Об утверждении руководства по составлению нормативного документа по качеству лекарственного препарата» представлены требования к определению бактериальных эндотоксинов в парентеральных лекарственных препаратах. В данном документе указано, что в нормативную документацию (НД) необходимо включить метод испытания и критерий приемлемости в отношении бактериальных эндотоксинов (БЭ), применяя методику с использованием лизата амебоцитов мечехвоста.

Цель исследования. Экспериментальная оценка возможности применения ЛАЛ-теста для определения бактериальных эндотоксинов в отечественных вакцинах для профилактики бешенства.

Материалы и методы. Материалом служила «Вакцина антирабическая культуральная концентрированная инактивированная очищенная» отечественного производства. Результаты и обсуждение. С целью подтверждения воспроизводимости методики испытания методом гель-тромб теста проводили в разные временные интервалы одним и/или двумя операторами. В ходе исследования оценивалась возможность использования количественного анализа с помощью фотометрических методов.

Выводы. Проведенное исследование продемонстрировало и экспериментально подтвердило возможность определения БЭ следующими методами: гель-тромб тест, турбидиметрический кинетический тест и хромогенный кинетический тест. Метод полуколичественного анализа с помощью гель-тромб теста рекомендуется выполнять в случае, если есть необходимость количественного анализа образцов вакцины в отсутствие возможности выполнения инструментальных методов. В ходе испытаний было установлено, что все серии образцов вакцин отечественного производства соответствовали теоретически рассчитанной и установленной норме («не более 25 ЕЭ/мл»).

1. Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 7 сентября 2018 г. № 151 «Об утверждении руководства по составлению нормативного документа по качеству лекарственного препарата. Приложение № 1 к Руководству по составлению нормативного документа по качеству лекарственного препарата. Лекарственные препараты для парентерального применения, п. 42. Доступно на: https://www.alta.ru/tamdoc/18kr0151/. Ссылка активна на 01.02.2021.

2. Европейская Фармакопея, 9 издание, 2017 г.

3. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Доступно на: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php. Ссылка активна на 01.02.2021.

4. Kevin L. Williams. Endotoxins: Pyrogens, LAL Testing and Depyrogenation (Drugs and the Pharmaceutical Sciences Book 167) 3rd Edition. Eli Lilly & Company Indianapolis, Indiana, U.S.A. Chapter 7. Nonendotoxin Microbial Pyrogens: Lesser Endotoxins and Superantigens p.133.

5. Шаповалова О. В., Неугодова Н. П., Рябцева М. С., Агаширинова А. А., Гунар О. В. Альтернативные биологические методы оценки качества лекарственных средств. Фармация. 2017;2:7–10. DOI: https://doi.org/None. Доступно на: https://pharmaciyajournal.ru/ru/25419218-2017-02-02. Ссылка активна на 01.02.2021.

6. Шаповалова О. В. «Разработка методических подходов для определения содержания бактериальных эндотоксинов в фармацевтических субстанциях» Автореферат дис. канд. фармацевтических наук: 14.04.02, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва 2018; Доступно на: https://www.dissercat.com/content/razrabot- ka-metodicheskikh-podkhodov-dlya-opredeleniya-soderzhaniya-bakterialnykh-endotoksino/read. Ссылка активна на 01.02.2021.

7. Шаповалова О. В., Неугодова Н. П., Сапожникова Г. А. Выбор метода определения бактериальных эндотоксинов. Антибиотики и химиотерапия. 2018; 63(5- 6):43–45. Scopus EID: 2-s2.0-85055337352. Доступно на: https://www.scopus.com/record/display.uri?eid=2-s2.0-85055337352&origin=inward&txGid=7e204826f26ade c5a846bfc4b655a399 Ссылка активна на 28.09.2021.