Новый подход к диагностике Varicella Zoster-вирусной инфекции с использованием ПЦР в режиме реального времени

Целью настоящей работы являлась проверка возможности использования метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для определения ДНК вируса Varicella Zoster в образцах периферической крови человека. Для этого исследовали образцы от двух групп пациентов, в результате чего вирусная ДНК была обнаружена в крови 48% больных опоясывающим герпесом и лишь у 4% представителей контрольной группы - практически здоровых доноров, у которых симптомы опоясывающего герпеса отсутствовали. Результаты ПЦР-РВ анализировали путём сравнения данных, полученных от клинических образцов, с калибровочными кривыми стандартных разведений контрольного положительного образца, в качестве которого использовали вирусную ДНК, выделенную из вакцинного препарата Varilrix. В реакциях ПЦР-РВ для амплификации были выбраны два различных фрагмента генома вирусной ДНК, при этом была установлена зависимость получаемых результатов от выбранного для амплификации фрагмента (ОРС 29 или ОРС 38). Как итог, была экспериментально подтверждена возможность использования ПЦР-РВ в качестве молекулярно-биологического метода лабораторной диагностики VZV-инфекции, включая атипичные и субклинические формы заболевания.

Varicella Zoster Virus, VZV-инфекция, ветряная оспа, опоясывающий герпес, вирусная ДНК, ПЦР в режиме реального времени, молекулярная диагностика, Varicella Zoster Virus, VZV-infection, chickenpox, herpes zoster, viral DNA, real-time PCR, molecular diagnostics

1. Reynolds M.A., Kruszon-Moran D., Jumaan A., Schmid D.S., McQuillan G.M. Varicella seroprevalence in the U.S.: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 1999 - 2004. Public Health Rep. 2010, 125 (6): 860 - 869.

2. Лавров В.Ф., Казанова А.С., Кузин С.Н., Дубоделов Д.В. Ветряная оспа и опоясывающий лишай: особенности заболеваемости и клинических проявлений. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2011, 3: 54 - 60.

3. Eshleman E., Shahzad A., Cohrs R.J. Varicella zoster virus latency. Future Virol. 2011; 6 (3): 341 - 355.

4. Gilden D.H., Gesser R., Smith J., Wellish M., Laquardia J.J., Cohrs R.J., Mahalinqam R. Presence of VZV and HSV-1 DNA in human nodose and celiac ganglia. Virus Genes. 2001, 23 (2): 145 - 147.

5. Казанова А.С., Лавров В.Ф., Зверев В.В. Вирус Varicella Zoster и заболевания сосудов центральной нервной системы. Журн. микробиол. 2015; 3: 106 - 116.

6. Amlie-Lefond C., Jubelt B. Neurologic manifestations of Varicella Zoster virus infections. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 2009; 9 (6): 430 - 434.

7. Gilden D., Cohrs R.J., Mahalingam R., Nagel M.A. Neurological disease produced by varicella zoster virus reactivation without rash. Curr. Top Microbiol. Immunol. 2010, 342: 243 - 253.

8. Gilden D.H., Dueland A.N., Devlin M.E., Mahalingam R., Cohrs R. Varicella-zoster virus reactivation without rash. J. Infect. Dis. 1992; 166 (Suppl. 1): 30 - 34.

9. Казанова А.С., Лавров В.Ф., Кузин С.Н., Эбралидзе Л.К., Ведунова С.Л., Малышев Н.А.и др. Сравнительная оценка эффективности традиционного серологического и модифицированного методов лабораторной диагностики опоясывающего герпеса. Журн. микробиол. 2013; 2: 83 - 90.

10. Фам Х.Ф., Боровикова Е.А., Сидоров А.В., Каратаева А.В., Антонова Т.П., Зверев В.В. Возможность использования двухступенчатой полимеразной цепной реакции в диагностике заболеваний, вызываемых вирусом VaricellaZoster. Журн. микробиол. 2015, 3: 25 - 30.

11. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Москва: Мир. 1984: 402 - 407.

12. Алаторцева Г.И., Сидоров А.В., Нестеренко Л.Н., Лухверчик Л.Н., Амиантова И.И., Доценко В.В. и др. Получение рекомбинантного аналога гликопротеина Е вируса Varicella Zoster: клонирование, экспрессия и исследование антигенных свойств. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2016; 15 (1): 77 - 86.

13. Depledge D.P., Palser A.L.,Watson S.J., Yi-Chun LaiI, Gray E.R., Grant P. et al. Specific capture and whole-genome sequencing of viruses from clinical samples. PloS One 2011; 6 (11): e27805.

14. Watzinger F., Suda M., Preuner S., Baumgartiner R., Ebner K., Baskova L. et al. Real-time quantitative PCR assays for detection and monitoring of pathogenic human viruses in immunosuppressed pediatric patients J. Clin. Mircrobiol. 2004, 42 (11): 5189 - 5198.

15. Dean F.B., Hosono S., Fang L., Wu X., Faruqi A.F., Bray-Ward P. et al. Comprehensive Human Genome Amplification Using Multiple Displacement Amplification. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002; 99 (8): 5261 - 5266.

16. Tyler S.D., Peters G.A., Grose C., Severini A., Gray M.J., Upton C. et al. Genomic cartography of varicella-zoster virus: a complete genome-based analysis of strain variability with implications for attenuation and phenotypic differences. Virology. 2007, 359: 447 - 458.

17. Loparev V.N., Gonzalez A., Deleon-Carnes M., Tipples G., Fickenscher H., Torfason E.G. et al. Global identification of three major genotypes of varicella-zoster virus: longitudinal clustering and strategies for genotyping. J. Virol. 2004, 78: 8349 - 8358.

18. Ozaki T., Ichikawa T., Matsui Y., Kondo H., Nagai T., Asano Y. et al. Lymphocyte-associated viremia in varicella. J. Med. Virol. 1986; 19: 249 - 253.

19. Asano Y., Itakura N., Kajita Y., Suga S., Yoshikawa T., Yazaki T. et al. Severity of viremia and clinical findings in children with varicella. J. Infect. Dis. 1990, 161 (6): 1095 - 1098.

20. Koropchak C.M., Solem S.M., Diaz P.S., Arvin A.M. Investigation of varicella-zoster virus infection of lymphocytes by in situ hybridization. J. Virol. 1989, 63: 2392-2395.

21. Koropchak C.M., Graham G., Palmer J., Winsberg M., Ting S.F., Wallace M. et al. Investigation of varicella-zoster virus infection by polymerase chain reaction in the immunocompetent host with acute varicella. J. Infect. Dis. 1991; 163: 1016 - 1022.

22. Kelley R., Mancao M., Lee F., Sawyer M., Nahmias A., Nesheim S. Varicella in children with perinatally acquired human immunodeficiency virus infection. J. Pediatr. 1994; 124 (2): 271 - 273.

23. Schott G.D. Triggering of delayed-onset postherpetic neuralgia. Lancet 1998; 351: 419 - 420.

24. Amlie-Lefond C., Mackin G.A., Ferguson M., Wright R.R., Mahalingam R., Gilden D.H. Another case of virologically confirmed zoster sine herpete, with electrophysiologic correlation. J. Neurovirol. 1996; 2: 136 - 138.