Иммуногенная активность секретируемых белоксодержащих соединений Staphylococcus aureus № 6

Трудность терапии инфекций, вызываемых S. aureus, определяется резистентностью возбудителя к применяемым антибиотикам, хроническим характером течения болезни, а также развитием на ее фоне снижения функций врожденного иммунитета и резистентности организма к инфекции. Несмотря на многочисленные усилия исследователей, в настоящее время отсутствуют противостафилококковые препараты, эффективность которых была бы установлена в завершенных клинических испытаниях.

Цель работы: получение секретируемых белоксодержащих соединений S. aureus № 6 и изучение их иммуногенных свойств.

Материалы и методы. Секретируемые белоксодержащие соединения (БСС) получали: «исходное» – из фильтратов культуральной жидкости S. aureus № 6, выращенных до конца фазы экспоненциального роста в соответствии с описанной ранее технологией I БСС и II БСС – после ионообменной хроматографии «исходного» БСС на колонках соответственно Q-Sepharose и DEAESepharose. Накопление специфических IgG в сыворотках крови иммунизированных кроликов и мышей изучали в ИФА, иммуногенную активность – в опытах активной и пассивной защиты мышей линии BALB/с, по обсемененности органов и анализу формирования абсцессов в почках. Результаты. Изученные БСС обладали антигенной активностью (повышение в 2,2 – 7,5 раза уровня специфических IgG в сыворотках иммунизированных животных по сравнению с контролем), что свидетельствует об стимуляции системы адаптивного иммунитета и о существенной протективной активности: в опытах по активной (индекс эффективности 2,63 – 4,28) и пассивной защите. Иммунизация мышей «исходным» и II БСС значительно снижала высеваемость S. aureus из тканей почек мышей и формирование абсцессов в почках. Это свидетельствует о влиянии изучаемых БСС на тяжесть течения стафилококковой инфекции и позволяет предположить их терапевтическое действие.

Заключение. Проведенный комплексный анализ выявил перспективность дальнейшего изучения «исходного» и II белоксодержащих соединений, имеющих высокий протективный потенциал в доклинических исследованиях, в качестве кандидатов на включение в состав препарата для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекций, вызываемых S. aureus. 

1. Покровский В.И., Акимкин В.Г., Брико Н.И, Брусина Е.Б., Зуева Л.П., Ковалишена О.В. и др. Внутрибольничные инфекции: новые горизонты профилактики. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2011; 1: 4 – 7.

2. Семенов Б.Ф. Терапевтические вакцины. Российские медицинские вести. 2000; 5 (3): 26 – 32.

3. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение. Иммунология. 2003; 4: 196 – 203.

4. Otto M. Novel targeted immunotherapy approaches for staphylococcal infection. Expert Opin Biol Ther. 2010 July; 10 (7): 1049 – 1059. Doi:10.1517/14712598.2010.495115.

5. Грубер И.М., Егорова Н.Б., Курбатова Е.А., Михайлова Н.А. Стратегия разработки противостафилококковых иммунопрофилактических и иммунотерапевтических препаратов. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2013; 4: .31 – 38.

6. Егорова Н.Б., Ефремова В.Н., Курбатова Е.А., Грубер И.М. Экспериментальная и клинико-иммунологическая оценка бесклеточной стафилококковой вакцины «Стафиловак». Журн. микробиологии. 2008; 6: 102 – 108.

7. Тришин А.В., Доненко Ф.В., Курбатова Е.А., Воюшин К.Е., Киселевский М.В., Егорова Н.Б. и др. Протективная активность секретируемых белков Streptococcus pneumoniae и Klebsiella pneumoniae. Журн. микробиологии. 2008; 4: 46 – 50.

8. Борисова О.Ю., Грубер И.М., Егорова Н.Б., Игнатова О.М., Асташкина Е.А. Генетическая характеристика штамма Staphylococcus aureus № 6 – продуцента секретируемых белоксодержащих соединений, обладающих протективными свойствами. Журн. микробиологии. 2014; 6: 43 – 48.

9. Грубер И.М., Доненко Ф.В., Игнатова О.М., Асташкина Е.А., Зиганшин Р.К., Зарядьева Е.А. и др. Анализ внеклеточного протеома Staphylococcus aureus № 6 в конце фазы экспоненциального роста. Журн. микробиологии. 2013; 3: 3 – 12.

10. Грубер И.М., Доненко Ф.В., Асташкина Е.А., Игнатова О.М., Егорова Н.Б., Ванеева Н.П. и др. Способ получения протективной белоксодержащей фракции бактерий. Патент РФ, № 2533815; 2014.

11. Корзая Л.И. Исследование иммунологических свойств комплекса водорастворимых антигенов, полученного из разных штаммов стафилококка: Автореф. дис. … канд. мед. наук. Москва; 1982.

12. Егорова Н.Б., Семенов Б.Ф., Курбатова Е.А., Ефремова В.Н., Каверина К.Г., Михайлова Н.А. Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами. Патент РФ, № 2209081; 2003.

13. Lederberg J. The nutrition of Salmonella. Arch. Biochem. 1950; 13 (2): 287 – 290.

14. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Analyt. Biochem. 1976; 72: 248 – 254.

15. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton Y.K., Reber P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Analyt. Chem. 1956; 28: 350 – 356.

16. Wong K.H., Barrera O., Sutton A., May J., Hochstein D.H., Robbins J.D. Standartization and control of meningococcal vaccine, groupA and group C polysaccharides. J. Biol. Standart. 1977; 5: 197 – 215.

17. Антитела. Методы. Кн. 2: Пер. с англ, ред. Д. Кэтти. Москва, Мир; 1991.

18. Лабинская А.С., Волина Е.Г., ред. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга I. Москва: БИНОМ; 2008.

19. Грубер И.М., Егорова Н.Б., Михайлова Н.А., Черкасова Л.С., Тарасова О.Е., Асташкина Е.А. и др. Исследование протективной активности стафилококковой вакцины «Стафиловак-2». Журн. микробиологии. 2014; 6: 54 – 58.

20. Arrecubieta С., Matsunaga I., Asai T., Naka Y., Deng M.C., Lowy F.D. Vaccination with clumping factor A and fibronectin binding protein A to prevent Staphylococcus aureus infection of an aortic patch in mice. J. Infect. Dis. 2008; 198: 571 – 575.

21. Cheng A.G., McAdow M., Kim H.K., Bae T., Missiakas D., Schneewind O. Contribution of coagulases towards Staphylococcus aureus disease and protective immunity. PLoS Pathog 6 (8): e1001036. Doi: 10.1371/journal.ppat.1001036.

22. Kim H.K., DeDent A, Cheng A.G., McAdow M., Bagnoli F., Missiakas D.M, Schneewind O. IsdA and IsdB antibodies protect mice against Staphylococcus aureus abscess formation and lethal challenge. Vaccine. 2010; 28: 6382 – 6392.