Получение рекомбинантного аналога гликопротеина Е вируса Varicella zoster: клонирование, экспрессия и исследование антигенных свойств

Получен рекомбинантный антиген GE, содержащий слитый с в-галактозидазой E. coli фрагмент (Gly48 - Glu135) гликопротеина E (gE) вируса Varicella zoster (VZV). Антигенная специфичность рекомбинантного антигена подтверждена с помощью вестерн-блоттинга и конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) в сравнении с его коммерческими аналогами и натуральными вирусными антигенами. Выявлено взаимодействие рекомбинантного белка GE с IgG кроликов, иммунизированных вакцинным штаммом вируса. Методом ИФА показано взаимодействие белка GE с 66% сывороток крови больных опоясывающим лишаем и 35% сывороток лиц из групп сравнения, в том числе, сывороток, содержащих антитела к другим вирусам герпеса, сывороток здоровых доноров, а также пациентов с различными формами кишечной патологии. Таким образом, экспериментально обоснована возможность применения полученного нами рекомбинантного GE VZV, в качестве антигена в диагностических и исследовательских целях.

вирус Varicella zoster, ORF68, гликопротеин Е, рекомбинантный антиген, иммуноферментный анализ, Varicella Zoster Virus, VZV, open reading frame 68, ORF 68, glycoprotein G, recombinant antigEn, enzyme immunoassay

1. Kuhn J. E., Klaffke K., Munk K., Braun R.W. HSV-1 gB and VZV gp-II crossreactive antibodies in human sera. Arch. Virol. 1990; 112: 203 - 213.

2. Kutinova L., Hainz P, Ludvikova V., Maresova L., Nemeckova S. Immune response to vaccinia virus recombinants expressing glycoproteins gE, gB, gH, and gL of varicella-zoster virus. Virology. 2001; 280: 211 - 220.

3. Montalvo E.A., Parmley R.T., Grose C. Structural analysis of the varicella-zoster virus gp98-gp62 complex: posttranslational addition of Nlinked and O-linked oligosaccharide moieties. J. Virol. 1985; 53: 761 - 770.

4. Haumont M., Jacquet A., Massaer M., Deleersnyder V., Mazzu P, Bollen A. et al. Purification, characterization and immunogenicity of recombinant varicella-zoster virus glycoprotein gE secreted by Chinese hamster ovary cells. Virus Res. 1996; 40: 199 - 204.

5. Grahn A., Studahl M., Nilsson S., Thomsson E., B ckstr m M., Bergstr m T. Varicella-Zoster Virus (VZV) Glycoprotein E Is a Serological AntigEn for Detection of Intrathecal Antibodies to VZV in Central Nervous System Infections, without Cross-Reaction to Herpes Simplex Virus 1. dinical and vaccine immunology. 2011; 18 (8): 1336 - 1342.

6. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Штамм бактерий Escherichia coli, используемый для получения рекомбинантных белков. Патент РФ, № 2043409, 1995.

7. Алаторцев В.Е., Алаторцева Г.И. Вектор pEL5c предназначенный для экспрессии чужеродной ДНК. Патент РФ, 2071503, 1997.

8. Новое в клонировании ДНК. Методы. Пер. с англ. Гловер Д., ред. Москва; 1989: 122 - 128.

9. Sameh Magdeldin and Annette Moser. Affinity Cromatography: Principles and applications, affinity chromatography Ed.: dr. S. Magdeldin. In Tech. 2012: 70 - 75.

10. Virca G.D., Travis J., Hall PK., Roberts R.C. Purification of -2-Macroglobulin by chromatography on Cibacron Blue sepharose. Analytical Biochemistry. 1978; 8: 274 - 276.

11. Rattana Wongchuphan, Beng Ti Tey, Wen Siang Tan, Senthil Kumar Subramanian, Farah Saleena Taip, Tau Chuan Ling. Purification of rabbit polyclonal immunoglobulin G using anion exchangers. Process Biochemistry 2011; 46: 101 - 107.

12. Практическая химия белка. Пер. с англ. Дарбре А., ред. Москва; 1989: 1 - 621.

13. Towbin H., Staehlin T., Gordon Y. Proc. nat. Acad. Sci. USA. 1979; 76: 4350 - 4359.

14. Ceroni A., Sibani S., Baiker A., Pothineni V.R., Bailer S.M., LaBaer J. et al. Systematic analysis of the IgG antibody immune response against Varicella zoster virus (VZV) using a self-assembled protein microarray. Mol Biosyst. 2010; 6 (9): 1604 - 1610. Doi: 10.1039/c003798b. Epub 2010 Jun 1.

15. Vizoso Pinto M. G., Pfrepper K.-I., Janke T., Noelting C., Sander M., Lueking A. et al. A systematic approach for the identification of novel, serologically reactive recombinant Varicella-Zoster Virus (VZV) antigens Virology Journal 2010, 7:165

16. Park R., Hwang J.Y., Lee K.I., Namkoong S., Choi.SK., Park S. et al. Measurement of antibodies to varicella-zoster virus using a virus-free fluorescent-antibody-to-membrane-antigen (FAMA) test Microbiol Biotechnol. 2015; 25 (2): 268 - 273